Techniques d'Analyses Biochimiques - Cours

La microscopie est une technique permettant d'observer des objets microscopiques, invisibles à l'œil nu, grâce à l'utilisation d'un microscope.

Technique d'imagerie utilisant la lumière visible pour observer des structures biologiques.

La limite de résolution de l'œil humain est de 0,2 mm. Cela signifie que l'œil ne peut pas distinguer des détails plus petits que 0,2 mm.

Instrument qui utilise un objectif et un oculaire pour agrandir l'image d'un objet de petite taille.

Le microscope est un instrument d'optique qui permet d'agrandir l'image d'un objet microscopique.

La distance minimale entre deux points que l'on peut distinguer.

Le micron (µm) est une unité de mesure de longueur équivalente à 1/1000 millimètre.

Formule qui définit le pouvoir séparateur d'un microscope optique.

Le microscope optique utilise la lumière visible pour éclairer et agrandir l'image de l'objet.

Composant du microscope qui concentre le flux lumineux.

Robert Hooke a été le premier à observer des cellules végétales en 1667. Il a vu que le liège était composé de petites cavités qu'il a appelées « cellules ».

Composant du microscope qui fournit un premier grossissement de l'image.

La lumière polarisée est une technique qui permet de distinguer différentes structures dans un échantillon en fonction de leur orientation moléculaire.

Composant du microscope qui fournit le deuxième grossissement et permet à l'observateur de visualiser l'image.

La microscopie à fluorescence utilise la lumière fluorescente pour éclairer l'échantillon, ce qui permet de visualiser certaines structures spécifiques.

L'agrandissement global du microscope est le produit des grossissements de l'objectif et de l'oculaire.

Un microscope est composé de deux systèmes optiques convergents : l'objectif et l'oculaire. L'objectif, avec une faible distance focale, crée une image agrandie. L'oculaire, avec une distance focale plus longue, agrandit encore l'image formée par l'objectif.

La distance fixe entre le foyer image de l'objectif et le foyer objet de l'oculaire est appelée intervalle optique. Elle est représentée par ∆ = F1′ F2.

Les boutons de réglage grossier et fin permettent de déplacer le bloc {objectif-tube-oculaire} pour ajuster la mise au point.

La lumière est concentrée sur l'objet à l'aide d'un miroir orientable et d'un condenseur (système optique convergent).

Les microscopes par transmission permettent l'observation directe de structures de l'ordre de 0,2 µm.

Ces microscopes (à lumière polarisée, à fond noir et à contraste de phase) donnent des informations indirectes sur l'ultrastructure des cellules.

Le microscope est un outil précieux pour l'observation de structures microscopiques, des cellules aux bactéries.

Ce procédé consiste à remplacer l'eau des cellules par un liquide pouvant être durci, permettant ainsi de couper des sections minces pour l'observation au microscope.

Il s'agit de la technique de coupe en fines tranches d'un échantillon durci, pour l'observation au microscope.

Cette étape vise à rendre les structures cellulaires visibles en augmentant le contraste entre les différentes composantes cellulaires.

Processus qui permet de conserver la forme et la structure des cellules dans un état proche de l'état vivant, en les tuant rapidement.

Ce type de fixation utilise des substances chimiques, comme l'alcool, pour tuer les cellules et les stabiliser.

Cette technique implique de congeler les cellules pour les durcir, permettant ainsi la réalisation de coupes.

Ce type de fixation utilise des agents physiques, comme le froid ou la chaleur, pour tuer les cellules et les solidifier.

Le but de la préparation d'un échantillon pour l'observation au microscope est d'obtenir des coupes fines et contrastées pour une meilleure visualisation des structures cellulaires.

En microscopie optique, le pouvoir séparateur est la distance minimale entre deux points que l'on peut distinguer. Plus le pouvoir séparateur est faible, plus on peut voir de détails fins.

La microscopie à contraste interférentiel différentiel (DIC) est une technique qui utilise la lumière polarisée pour observer des différences d'indice de réfraction dans l'échantillon. Cela permet de visualiser des structures transparentes, comme les membranes cellulaires.

En microscopie à fluorescence, le pouvoir séparateur est supérieur à celui du microscope photonique ordinaire, car la lumière UV utilisée a une longueur d'onde plus faible, ce qui permet d'observer des détails plus fins.

Un fluorochrome est une substance fluorescente qui se lie à une structure biologique spécifique. Elle est utilisée en microscopie à fluorescence pour rendre ces structures visibles.

La préparation des échantillons pour la microscopie photonique consiste à les rendre suffisamment minces pour que la lumière puisse les traverser et à les colorer pour améliorer leur contraste.

La lumière ultraviolette (UV) est utilisée en microscopie à fluorescence car elle a une longueur d'onde plus faible que la lumière visible. Cela permet d'obtenir un meilleur pouvoir séparateur.

La fluorescence est la propriété d'une molécule d'émettre de la lumière visible lorsqu'elle est éclairée par une lumière de longueur d'onde plus courte.

La microscopie en contraste de phase exploite les variations d'indice de réfraction dans un échantillon pour créer un contraste visible. En utilisant un anneau lumineux et une plaque de phase, elle met en opposition de phase la lumière non-déviée et la lumière diffractée, créant des interférences destructrices qui révèlent les variations d'indice de réfraction.

La microscopie en contraste de phase est une technique qui utilise les différences de phase de la lumière traversant un échantillon pour créer un contraste. Elle permet d'observer les structures transparentes et non colorées.

La microscopie DIC utilise la lumière polarisée pour révéler les variations d'indice de réfraction dans un échantillon, créant des images avec un relief ombré. Cette technique est particulièrement utile pour l'observation des structures cellulaires et des tissus.

En microscopie en contraste de phase, la lumière non-déviée par l'échantillon traverse l'anneau de la plaque de phase, ce qui la met en opposition de phase avec la lumière diffractée. Cette opposition de phase crée des interférences destructrices qui révèlent les variations d'indice de réfraction de l'échantillon.

Le microscope à contraste interférentiel différentiel (DIC) utilise deux prismes de Wollaston pour séparer, faire traverser l'échantillon et recombiner les rayons polarisés. Ces rayons sont en phase différente après avoir traversé l'échantillon, ce qui crée des interférences qui révèlent les variations d'indice de réfraction.

Le contraste en microscopie en contraste de phase est créé par les variations d'amplitude lumineuse résultant des interférences destructrices entre la lumière non-déviée et la lumière diffractée. Ces variations d'amplitude sont directement liées aux variations d'indice de réfraction de l'échantillon.

Le microscope à contraste interférentiel différentiel (DIC) utilise un jeu de filtres spéciaux pour modifier l'amplitude et la phase de la lumière polarisée, ce qui permet de visualiser les variations d'indice de réfraction de l'échantillon avec un relief ombré.