Recombinant Vectors Analysis
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Questions and Answers

Perché è preferibile sintetizzare il DNA partendo da frammenti del genoma anziché dal DNA genomico integro?

  • Per scegliere la zona del genoma umano d'interesse (correct)
  • Per ridurre i costi delle analisi
  • Per evitare errori durante il sequenziamento
  • Per rendere più facile la clonazione

    • Cosa si ottiene dopo 11 anni di sequenziamento del genoma umano?

  • Un mRNA
  • Un genoma umano completo
  • Un plasmide
  • Una libreria genomica (correct)

    • Qual è il processo necessario per convertire l'mRNA in DNA?

  • Trascrizione
  • Retrotrascrizione (correct)
  • Replicazione
  • Traduzione

    • A cosa servono le sonde generate tramite PCR?

    <p>Al southern blot o northern blot</p> Signup and view all the answers

    Perché il sequenziamento di un genoma umano è molto complicato?

    <p>Perché è lungo e costoso e può portare a tanti errori</p> Signup and view all the answers

    Cos'è il dogma centrale della biologia?

    <p>DNA → RNA → PROTEINA</p> Signup and view all the answers

    Qual è il principale obiettivo dei plasmidi ricombinanti ingegnerizzati?

    <p>Riconoscere i batteri contenenti il DNA ricombinante</p> Signup and view all the answers

    Cosa accade all'unità trascrizionale della tetraciclina quando il plasmide viene tagliato a livello della polylinker?

    <p>Viene interrotta</p> Signup and view all the answers

    Perché i batteri contenenti il plasmide chiuso iniziano a crescere sulla piastra contenente la tetraciclina?

    <p>Perché il plasmide è resistente alla tetraciclina</p> Signup and view all the answers

    Cosa si ottiene quando si appoggia il foglietto di carta sulla piastra contenente i batteri?

    <p>Una copia speculare della piastra</p> Signup and view all the answers

    Quale è il risultato finale della selezione inserzionale?

    <p>La selezione dei batteri contenenti il DNA ricombinante</p> Signup and view all the answers

    Quale è il ruolo della polylinker all'interno del plasmide?

    <p>Interruzione dell'unità trascrizionale della tetraciclina</p> Signup and view all the answers

    Che cosa viene clonato all'interno del plasmide per produrre insulina?

    <p>cDNA dell'insulina umana</p> Signup and view all the answers

    Perché vengono utilizzati batteri invece delle cellule eucariotiche per produrre insulina?

    <p>Perché l'insulina non necessita di modifiche post-traduzionali</p> Signup and view all the answers

    Cos'è un vettore di espressione?

    <p>Un sistema che deve avere un promotore</p> Signup and view all the answers

    Qual è il nome del sito all'interno del plasmide che serve per scopi commerciali?

    <p>RBS</p> Signup and view all the answers

    Che tipo di insulina veniva estratta inizialmente?

    <p>Insulina del maiale</p> Signup and view all the answers

    Perché vengono utilizzati plasmidi ricombinanti per produrre insulina?

    <p>Perché producono elevate quantità di insulina</p> Signup and view all the answers

    Perché possono non essere visibili le differenze di espressione genica tra i campioni?

    <p>Perché la PCR è un'amplificazione sintetica</p> Signup and view all the answers

    Che cosa succede quando la PCR arriva al plateau?

    <p>Le differenze di espressione genica non sono più distinguibili</p> Signup and view all the answers

    Perché è importante fermare la PCR prima che i campioni arrivino alla fase di plateau?

    <p>Perché le differenze di espressione genica sono più visibili nella fase esponenziale</p> Signup and view all the answers

    Che cos'è la PCR quantitativa in tempo reale?

    <p>Una variazione tecnica della metodica PCR che permette di vedere la curva di amplificazione del gene in tempo reale</p> Signup and view all the answers

    Perché è difficile bloccare l'esperimento alla fase esponenziale?

    <p>Perché non possiamo vedere a che punto si trova la PCR</p> Signup and view all the answers

    Che cosa si può vedere durante la PCR quantitativa in tempo reale?

    <p>La curva di amplificazione del gene</p> Signup and view all the answers

    Come vengono create le nanoparticelle lipidiche per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?

    <p>Inserendo DNA ricombinante all'interno di piccole vescicole fatte da un doppio strato fosfolipidico</p> Signup and view all the answers

    Qual è il principio chimico-fisico che consente l'ingresso del DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?

    <p>Fusione tra la vescicola e la membrana plasmatica</p> Signup and view all the answers

    Come si chiamano le vescicole utilizzate per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?

    <p>Liposomi</p> Signup and view all the answers

    Perché si utilizza il calcio fosfato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?

    <p>Perché il calcio fosfato è carico positivamente e il DNA è carico negativamente</p> Signup and view all the answers

    Qual è il metodo utilizzato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche che non sono permissive?

    <p>Utilizzo di virus ricombinati</p> Signup and view all the answers

    Come vengono trattati i virus utilizzati per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?

    <p>Vengono resi non duplicanti</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Estrazione del RNA e retrotrascrizione

    • L'analisi dell'espressione di un gene richiede la estrazione del RNA e la retrotrascrizione per ottenere il DNA
    • La PCR (Polymerase Chain Reaction) è una tecnica utilizzata per amplificare il DNA, ma può essere sfavorita dall'arrivo a plateau
    • È necessario interrompere la PCR durante la fase esponenziale per evitare di perdere le differenze tra i campioni

    Analisi semi-quantitativa

    • La PCR non è una tecnica quantitativa, poiché non fornisce informazioni sulla quantità assoluta del gene espresso
    • Tuttavia, è possibile ottenere informazioni semi-quantitative sulla differenza di espressione del gene tra i campioni

    PCR Quantitativa in Tempo Reale

    • La PCR quantitativa in tempo reale è una variante della PCR che consente di visualizzare la curva di amplificazione del gene in tempo reale
    • Questa tecnica permette di ottenere informazioni quantitative sulla espressione del gene

    Libreria genomica

    • Una libreria genomica è una raccolta di sequenze di DNA che rappresentano il genoma umano
    • Le librerie genomiche vengono utilizzate per produrre sonde per l'analisi di sequenziamento e per creare vettori di espressione

    Insulina ricombinante

    • L'insulina è stata la prima proteina ricombinante prodotta attraverso la tecnica del clonaggio molecolare
    • L'insulina viene prodotta utilizzando plasmidi ricombinanti all'interno di batteri

    Vettori di espressione

    • I vettori di espressione sono sistemi di conservazione delle sequenze di DNA umano
    • I vettori di espressione devono avere un promotore per permettere l'espressione della proteina

    Processo di retrotrascrizione

    • Il processo di retrotrascrizione è il processo che converte l'mRNA in DNA
    • Questo processo è necessario per clonare il gene all'interno di un plasmide

    Introduzione di acidi nucleici all'interno delle cellule eucariotiche

    • È più complesso introdurre un acido nucleico all'interno delle cellule eucariotiche rispetto alle cellule procariotiche
    • Esistono diversi stratagemmi per introdurre gli acidi nucleici all'interno delle cellule eucariotiche, come l'utilizzo di nanoparticelle lipidiche, l'aggiunta di molecole di calcio fosfato e la microiniezione.

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    Quiz Team

    Description

    Learn about plasmids engineered to recognize recombinant DNA in bacteria colonies on a plate. This system is based on insertional selection and presents a second antibiotic resistance and a polylinker inserted into another resistant gene.

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