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Questions and Answers
Perché è preferibile sintetizzare il DNA partendo da frammenti del genoma anziché dal DNA genomico integro?
Perché è preferibile sintetizzare il DNA partendo da frammenti del genoma anziché dal DNA genomico integro?
- Per scegliere la zona del genoma umano d'interesse (correct)
- Per ridurre i costi delle analisi
- Per evitare errori durante il sequenziamento
- Per rendere più facile la clonazione
Cosa si ottiene dopo 11 anni di sequenziamento del genoma umano?
Cosa si ottiene dopo 11 anni di sequenziamento del genoma umano?
- Un mRNA
- Un genoma umano completo
- Un plasmide
- Una libreria genomica (correct)
Qual è il processo necessario per convertire l'mRNA in DNA?
Qual è il processo necessario per convertire l'mRNA in DNA?
- Trascrizione
- Retrotrascrizione (correct)
- Replicazione
- Traduzione
A cosa servono le sonde generate tramite PCR?
A cosa servono le sonde generate tramite PCR?
Perché il sequenziamento di un genoma umano è molto complicato?
Perché il sequenziamento di un genoma umano è molto complicato?
Cos'è il dogma centrale della biologia?
Cos'è il dogma centrale della biologia?
Qual è il principale obiettivo dei plasmidi ricombinanti ingegnerizzati?
Qual è il principale obiettivo dei plasmidi ricombinanti ingegnerizzati?
Cosa accade all'unità trascrizionale della tetraciclina quando il plasmide viene tagliato a livello della polylinker?
Cosa accade all'unità trascrizionale della tetraciclina quando il plasmide viene tagliato a livello della polylinker?
Perché i batteri contenenti il plasmide chiuso iniziano a crescere sulla piastra contenente la tetraciclina?
Perché i batteri contenenti il plasmide chiuso iniziano a crescere sulla piastra contenente la tetraciclina?
Cosa si ottiene quando si appoggia il foglietto di carta sulla piastra contenente i batteri?
Cosa si ottiene quando si appoggia il foglietto di carta sulla piastra contenente i batteri?
Quale è il risultato finale della selezione inserzionale?
Quale è il risultato finale della selezione inserzionale?
Quale è il ruolo della polylinker all'interno del plasmide?
Quale è il ruolo della polylinker all'interno del plasmide?
Che cosa viene clonato all'interno del plasmide per produrre insulina?
Che cosa viene clonato all'interno del plasmide per produrre insulina?
Perché vengono utilizzati batteri invece delle cellule eucariotiche per produrre insulina?
Perché vengono utilizzati batteri invece delle cellule eucariotiche per produrre insulina?
Cos'è un vettore di espressione?
Cos'è un vettore di espressione?
Qual è il nome del sito all'interno del plasmide che serve per scopi commerciali?
Qual è il nome del sito all'interno del plasmide che serve per scopi commerciali?
Che tipo di insulina veniva estratta inizialmente?
Che tipo di insulina veniva estratta inizialmente?
Perché vengono utilizzati plasmidi ricombinanti per produrre insulina?
Perché vengono utilizzati plasmidi ricombinanti per produrre insulina?
Perché possono non essere visibili le differenze di espressione genica tra i campioni?
Perché possono non essere visibili le differenze di espressione genica tra i campioni?
Che cosa succede quando la PCR arriva al plateau?
Che cosa succede quando la PCR arriva al plateau?
Perché è importante fermare la PCR prima che i campioni arrivino alla fase di plateau?
Perché è importante fermare la PCR prima che i campioni arrivino alla fase di plateau?
Che cos'è la PCR quantitativa in tempo reale?
Che cos'è la PCR quantitativa in tempo reale?
Perché è difficile bloccare l'esperimento alla fase esponenziale?
Perché è difficile bloccare l'esperimento alla fase esponenziale?
Che cosa si può vedere durante la PCR quantitativa in tempo reale?
Che cosa si può vedere durante la PCR quantitativa in tempo reale?
Come vengono create le nanoparticelle lipidiche per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Come vengono create le nanoparticelle lipidiche per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Qual è il principio chimico-fisico che consente l'ingresso del DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Qual è il principio chimico-fisico che consente l'ingresso del DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Come si chiamano le vescicole utilizzate per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Come si chiamano le vescicole utilizzate per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Perché si utilizza il calcio fosfato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Perché si utilizza il calcio fosfato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Qual è il metodo utilizzato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche che non sono permissive?
Qual è il metodo utilizzato per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche che non sono permissive?
Come vengono trattati i virus utilizzati per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
Come vengono trattati i virus utilizzati per introdurre DNA ricombinante all'interno delle cellule eucariotiche?
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Study Notes
Estrazione del RNA e retrotrascrizione
- L'analisi dell'espressione di un gene richiede la estrazione del RNA e la retrotrascrizione per ottenere il DNA
- La PCR (Polymerase Chain Reaction) è una tecnica utilizzata per amplificare il DNA, ma può essere sfavorita dall'arrivo a plateau
- È necessario interrompere la PCR durante la fase esponenziale per evitare di perdere le differenze tra i campioni
Analisi semi-quantitativa
- La PCR non è una tecnica quantitativa, poiché non fornisce informazioni sulla quantità assoluta del gene espresso
- Tuttavia, è possibile ottenere informazioni semi-quantitative sulla differenza di espressione del gene tra i campioni
PCR Quantitativa in Tempo Reale
- La PCR quantitativa in tempo reale è una variante della PCR che consente di visualizzare la curva di amplificazione del gene in tempo reale
- Questa tecnica permette di ottenere informazioni quantitative sulla espressione del gene
Libreria genomica
- Una libreria genomica è una raccolta di sequenze di DNA che rappresentano il genoma umano
- Le librerie genomiche vengono utilizzate per produrre sonde per l'analisi di sequenziamento e per creare vettori di espressione
Insulina ricombinante
- L'insulina è stata la prima proteina ricombinante prodotta attraverso la tecnica del clonaggio molecolare
- L'insulina viene prodotta utilizzando plasmidi ricombinanti all'interno di batteri
Vettori di espressione
- I vettori di espressione sono sistemi di conservazione delle sequenze di DNA umano
- I vettori di espressione devono avere un promotore per permettere l'espressione della proteina
Processo di retrotrascrizione
- Il processo di retrotrascrizione è il processo che converte l'mRNA in DNA
- Questo processo è necessario per clonare il gene all'interno di un plasmide
Introduzione di acidi nucleici all'interno delle cellule eucariotiche
- È più complesso introdurre un acido nucleico all'interno delle cellule eucariotiche rispetto alle cellule procariotiche
- Esistono diversi stratagemmi per introdurre gli acidi nucleici all'interno delle cellule eucariotiche, come l'utilizzo di nanoparticelle lipidiche, l'aggiunta di molecole di calcio fosfato e la microiniezione.
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