45 Questions
¿Cuánto tiempo debe dejar polimerizar el gel de separación?
Al menos 45 minutos
¿Qué debe hacerse con el soporte verde después de que el gel de separación ha polimerizado?
Inclinar el soporte verde para descartar el etanol
¿Cómo se debe remover el exceso de etanol del gel de separación?
Con 100 µL de agua ultrapura (o 50 µL en cada extremo) y luego con un kimwipe
¿Cuál es el porcentaje de acrilamida/bisacrilamida en la solución para preparar el stacking gel?
30% (2.67%)
¿Cuánto tiempo debe dejar polimerizar la solución del stacking gel?
30 minutos
¿Cómo se debe transferir la solución del stacking gel entre los cristales?
Lentamente con una micropipeta, evitando que se formen burbujas
¿Qué debe hacerse con la peinilla en el stacking gel?
Insertarla lentamente en el stacking gel
¿Qué debe hacerse con los cristales con el gel polimerizado en la parte IV?
Abrir las ventanillas y remover los cristales del casting frame
¿Cómo se deben colocar los cristales con el gel en el soporte del electrodo?
Con el cristal más corto hacia adentro, verificando que ambos lados del soporte del electrodo tengan los cristales bien colocados
¿Qué precauciones debemos tomar al empezar a trabajar con el soporte del gel?
Debemos trabajar con gafas y guantes.
¿Cómo debemos limpiar los cristales antes de la polimerización del gel?
Los cristales deben limpiarse primero con agua y jabón, luego con agua desionizada, y finalmente con etanol y un kimwipe.
¿Cuál es el propósito del separador de 0.75mm en la preparación de los cristales?
El separador de 0.75mm se utiliza para colocar el cristal más corto sobre el cristal largo.
¿Cómo debemos colocar los cristales en el soporte verde?
Los cristales deben colocarse en el soporte verde con el cristal más corto hacia el frente y verificando que ambos cristales estén nivelados.
¿Qué es la goma gris en el proceso de preparación del soporte del gel?
La goma gris se coloca en el soporte transparente.
¿Cómo se ajusta la parte superior de los cristales en el soporte transparente?
La parte superior de los cristales se ajusta con la palanca con resorte.
¿Cuál es el propósito de la peinilla en la preparación del gel de separación?
La peinilla se utiliza para formar las fosas en el gel.
¿Dónde se debe trazar la línea en el cristal corto para la preparación del gel de separación?
Se debe trazar la línea a una distancia de 0.5 mm por debajo del borde de la peinilla.
¿Qué se debe hacer con cualquier porción no polimerizada que reste después de la polimerización del gel?
La porción no polimerizada que reste se debe mezclar con agente calítico.
¿Cuál es el propósito de calentar las muestras y el marcador en el 'Heat block' a 95°C?
Desnaturalizar las proteínas.
¿Qué efecto tiene el β-mercaptoetanol sobre la estructura terciaria de la proteína?
Rompe los puentes disulfuro y altera la estructura terciaria de la proteína.
¿Cuál es la concentración de proteínas totales en la muestra del citoplasma obtenida mediante el método BCA?
1844 µg/mL.
¿Cómo contribuye el calor al proceso de separación de proteínas?
El calor ayuda a romper los puentes de hidrógeno y a inactivar proteasas que puedan estar presentes.
¿Cuántos microlitros se necesitan para obtener 1 µg de proteínas totales?
0.5 µL.
¿Cuál es la dilución utilizada para preparar el Broad Range Marker?
1:20.
¿Qué característica tienen todas las proteínas después del tratamiento con β-mercaptoetanol y calor?
Todas las proteínas tienen carga negativa y conformación lineal.
¿Por qué se utiliza la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida para separar las proteínas?
Se utiliza para separar las proteínas por peso molecular.
¿Cuál es el volumen total a preparar para el Broad Range Marker?
100 µL.
¿Cuál es el objetivo del tinte Coomassie Blue en el proceso de electroforesis en gel de poliacrilamida?
Confirmar la presencia de las proteínas totales en la gel de poliacrilamida.
¿Por qué se utiliza un 'lid lock' durante el calentamiento de las muestras?
Para evitar la evaporación de la muestra.
¿Cuál es el propósito del Sample buffer, Laemmli, en el proceso de electroforesis?
Preparar las muestras de proteínas para la electroforesis.
¿Cuántos microlitros de Laemmli Buffer se necesitan para preparar la muestra?
95 µL.
¿Qué es el Electrophoresis buffer 10X Tris-Cl-glycine-SDS Buffer pH 8.3?
Un buffer que se utiliza para la electroforesis en gel de poliacrilamida.
¿Cuál es el orden en que se deben agregar los componentes para preparar la muestra?
Agua ultrapura, muestra y Laemmli buffer (sample buffer) 5X.
¿Cuál es la temperatura a la que se calientan las muestras y el marcador?
95°C.
¿Cuál es el propósito del marcador molecular- Broad Range Marker en el proceso de electroforesis?
Servir de referencia para la separación de proteínas por peso molecular.
¿Qué precaución se debe tener en cuenta al trabajar con acrilamida?
La acrilamida es neurotóxica.
¿Cuál es el volumen total de la mezcla para obtener la concentración deseada?
20 µl
¿Cuál es la concentración de la proteína GAPDH en el marcador Broad Range?
No se puede determinar con certeza, pero se espera encontrarla entre las proteínas de 37 kDa y 45 kDa
¿Cuántos µl de agua se necesitan para alcanzar un volumen total de 20 µl?
15.5 µl
¿Cuál es el peso molecular de la albúmina de bovino presente en el marcador Broad Range?
66 kDa
¿Cuántos µl de marcador se deben servir en el gel?
5 µl
¿Cuál es el tiempo y la velocidad de centrifugación recomendados para las muestras?
30 segundos a 4,000 rpm
¿Cuál es el voltaje recomendado para la electroforesis?
90 voltios
¿Cuál es el propósito de detener la corrida de la electroforesis?
Permitir que las muestras se acomoden en la fosa y se introduzcan al gel de poliacrilamida lentamente
¿Cuántos µl de muestra se deben servir en el gel?
10 µl
Learn how proteins are denatured and their structure is affected by chemicals like β-mercaptoethanol and heat, and how this process is used to separate proteins from cell cytoplasm.
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