Microscopía: Tipos y Aplicaciones

Microscopy

• Types of microscopy:
  • Light microscopy: uses visible light to produce an image
  • Fluorescence microscopy: uses fluorescent dyes to produce an image
  • Electron microscopy: uses a beam of electrons to produce an image
  • Confocal microscopy: uses a laser to produce a high-resolution image
• Applications:
  • Observing cellular structures and morphology
  • Studying cellular processes and dynamics
  • Visualizing specific proteins or molecules using fluorescent markers

Cell Fractionation

• Definition: a process of separating cellular components into distinct fractions based on their properties
• Methods:
  • Centrifugation: separates components based on density and size
  • Chromatography: separates components based on charge and affinity
  • Electrophoresis: separates components based on charge and size
• Applications:
  • Isolating specific cellular components (e.g. nuclei, mitochondria, membranes)
  • Studying the composition and function of specific cellular components
  • Preparing samples for further analysis (e.g. Western blot, mass spectrometry)

Flow Cytometry

• Definition: a technique used to analyze and sort cells based on their physical and chemical properties
• Principles:
  • Cells are suspended in a fluid and passed through a laser beam
  • The scattered light and fluorescence are measured to determine cellular properties
• Applications:
  • Analyzing cell populations and identifying specific subpopulations
  • Studying cellular responses to stimuli or treatments
  • Isolating specific cell populations for further analysis or culture

Cell Culture

• Definition: the growth of cells in a controlled laboratory setting
• Types:
  • Primary cell culture: cells are isolated directly from a tissue or organism
  • Immortalized cell culture: cells are genetically modified to proliferate indefinitely
  • Cell line: a population of cells that have been passaged multiple times
• Applications:
  • Studying cellular behavior and responses to stimuli
  • Developing and testing therapeutic agents
  • Producing biologics and vaccines

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

• Definition: a technique used to analyze the binding of proteins to specific DNA sequences
• Principles:
  • Cells are treated with a cross-linking agent to preserve protein-DNA interactions
  • The chromatin is fragmented and antibodies specific to the protein of interest are used to immunoprecipitate the protein-DNA complexes
  • The precipitated DNA is then analyzed using techniques such as PCR or sequencing
• Applications:
  • Studying the regulation of gene expression and transcription
  • Identifying the binding sites of specific transcription factors
  • Analyzing the epigenetic landscape of cells

Microscopía

• Tipos de microscopía:
  • Microscopía de luz: utiliza luz visible para producir una imagen
  • Microscopía de fluorescencia: utiliza tintes fluorescentes para producir una imagen
  • Microscopía electrónica: utiliza un haz de electrones para producir una imagen
  • Microscopía confocal: utiliza un láser para producir una imagen de alta resolución
• Aplicaciones:
  • Observar estructuras y morfología celulares
  • Estudiar procesos y dinámicas celulares
  • Visualizar proteínas o moléculas específicas utilizando marcadores fluorescentes

Fraccionamiento Celular

• Definición: proceso de separar componentes celulares en fracciones distintas basadas en sus propiedades
• Métodos:
  • Centrifugación: separa componentes basados en la densidad y el tamaño
  • Cromatografía: separa componentes basados en la carga y la afinidad
  • Electroforesis: separa componentes basados en la carga y el tamaño
• Aplicaciones:
  • Aislar componentes celulares específicos (p. ej. núcleos, mitocondrias, membranas)
  • Estudiar la composición y función de componentes celulares específicos
  • Preparar muestras para análisis adicionales (p. ej. Western blot, espectrometría de masa)

Citometría de Flujo

• Definición: técnica utilizada para analizar y clasificar células basadas en sus propiedades físicas y químicas
• Principios:
  • Las células se suspenden en un fluido y se pasan través de un haz láser
  • La luz dispersada y la fluorescencia se miden para determinar propiedades celulares
• Aplicaciones:
  • Analizar poblaciones celulares y identificar subpoblaciones específicas
  • Estudiar respuestas celulares a estímulos o tratamientos
  • Aislar poblaciones celulares específicas para análisis adicionales o cultivo

Cultivo Celular

• Definición: crecimiento de células en un entorno de laboratorio controlado
• Tipos:
  • Cultivo celular primario: células se aíslan directamente de un tejido o organismo
  • Cultivo celular inmortalizado: células se modifican genéticamente para proliferar indefinidamente
  • Línea celular: población de células que se han pasado múltiples veces
• Aplicaciones:
  • Estudiar el comportamiento y respuestas celulares a estímulos
  • Desarrollar y probar agentes terapéuticos
  • Producir biológicos y vacunas

Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP)

• Definición: técnica utilizada para analizar la unión de proteínas a secuencias de ADN específicas
• Principios:
  • Las células se tratan con un agente de cross-linking para preservar interacciones proteína-ADN
  • El cromatina se fragmenta y se utilizan anticuerpos específicos para la proteína de interés para inmunoprecipitar complejos proteína-ADN
  • El ADN precipitado se analiza utilizando técnicas como PCR o secuenciación
• Aplicaciones:
  • Estudiar la regulación de la expresión génica y la transcripción
  • Identificar sitios de unión de factores de transcripción específicos
  • Analizar el paisaje epigenético de células