M6 - Histologie: Tissus conjonctifs

• M6 – Histologie: Fiche de cours n°3 concerne les tissus conjonctifs ou de soutien et sert d'actualisation.

Préparation de l'échantillon

• Prélèvement du fragment tissulaire: carotte biopsique ou fragment d'organe, ou lors d'une opération au bloc.
• Fixation tissulaire: régulièrement avec du formol.
• Inclusion du fragment tissulaire: le plus souvent dans la paraffine (nécessite une déshydratation préalable).
• Coupe du bloc tissulaire: bloc de paraffine coupé avec un microtome en coupes de 3 à 4 microns d'épaisseur, étalées sur une lame de verre.
• Coloration standard de l'échantillon: réalisée par des automates ou manuellement; nécessite déparaffinage et réhydratation.

Techniques d'étude des coupes

• Étude morphologique des tissus: coloration type HES (hématéine-éosine-safran).
• Détection d'antigènes exprimés par les cellules: immunohistochimie (anticorps couplé à une enzyme) ou immunofluorescence (anticorps couplé à un fluorochrome).
• Examen microscopique: scanner haute définition pour un format numérique de la lame, permettant l'utilisation d'applications d'intelligence artificielle (IA).

Présentation des tissus conjonctifs

• Grand terrain tissulaire avec une circulation importante de cellules et de molécules; phénomènes d'échanges et de stockage importants.
• Tissu généralement lâche: cellules paraissent dispersées au sein d'une substance fondamentale, mais sont disposées en réseaux.
• Composition inclut des fibres, une substance fondamentale (protéoglycanes), et un volume interstitiel important.
• Grandes distances intercellulaires.
• Présence d'interactions: réseaux cellulaires via prolongements cytoplasmiques, et interactions cellules-MEC.

Origine embryonnaire

• Tissu conjonctif embryonnaire primitif: issu du mésoblaste.
• Cellules indifférenciées multipotentes: se différencient en fibroblastes, ostéoblastes, adipocytes, chondrocytes. Sont fusiformes ou étoilées avec de longs prolongements cytoplasmiques.
• MEC: riche en hyaluronane, dépourvue de fibres matures.
• Cellules souches mésenchymateuses (CSM): conservent leur multipotence, et ouvrent des perspectives thérapeutiques (réparation tissulaire).
• CSM du tissu osseux: présentes chez l'adulte, peuvent se différencier en cellules osseuses, cartilagineuses ou adipeuses.

Tissu conjonctif commun

• Deux types de cellules: fixes/résidentes et mobiles/libres.
• Matrice extracellulaire: substance fondamentale amorphe et deux systèmes de fibres (collagène, élastiques).
• Rôle des cellules fixes (fibroblastes): synthèse, entretien des éléments de la MEC et remodelage tissulaire.
• Rôle des cellules mobiles: défense/réponse immunitaire vis-à-vis des agressions extérieures.
• Communication moléculaire: cellules fixes et mobiles interagissent via des cytokines.

Le fibroblaste

• Cellule principale du tissu conjonctif commun, obligatoire, sans lame basale.
• Morphologie: fusiforme avec un noyau ovalaire central et un cytoplasme basophile (coloration bleutée).
• Ancrage à la matrice via des récepteurs intégrines interagissant avec la fibronectine de la MEC.
• Rôle des intégrines: interactions bi-directionnelles avec l'environnement.

Fonctions du fibroblaste

• Synthèse et dégradation des constituants de la MEC: collagènes, élastines, glycosaminoglycanes, glycoprotéines.
• Équilibre entre synthèse et dégradation: permet le remodelage, l'entretien et la réparation de la matrice.
• Autres fonctions: participation à la synthèse de la lame basale, immunité (immunomodulation) et synthèse de facteurs de croissance.

Le myofibroblaste

• Cellules présentant des propriétés à la fois des fibroblastes et des cellules musculaires lisses.
• Caractéristiques des fibroblastes: capacité proliférative, synthèse de collagène, absence de lame basale.
• Caractéristiques des cellules musculaires lisses: capacité de contraction, actine musculaire lisse alpha et myosine non musculaire.
• Peu nombreux dans les tissus normaux.
• Reconnaissance par immunohistochimie avec un anticorps dirigé contre l'actine musculaire lisse.

Rôle majeur dans la cicatrisation et la réparation tissulaire du myofibroblaste

• Phase inflammatoire: arrivée sur le site tissulaire lésé des cellules inflammatoires, synthèse locale de cytokines, migration des fibroblastes vers la zone endommagée.
• Phase de prolifération: activation et prolifération des fibroblastes, différenciation en myofibroblastes.
• Phase de réparation: des pertes de tissu par production de MEC par les fibroblastes et myofibroblastes.
• Phase de contraction: des myofibroblastes entraînant une rétraction de la MEC dans la zone tissulaire lésée et un rapprochement des berges.
• Angiogenèse locale: développement d'un réseau vasculaire.
• Devenir des myofibroblastes: mourir par apoptose ou se reconvertir en fibroblaste.

Dysfonctionnement du myofibroblaste : pathologies

• Production excessive de MEC: déformation d'un tissu, altération de la fonction d'un organe, cicatrice hypertrophique ou chéloïde.
• Rôle dans les cancers: favorisent l'extension et la progression tumorale.

Cellules mobiles / libres

• Précurseurs situés dans la moelle hématopoïétique.
• Deux grandes familles: mastocytes et leucocytes.

Les mastocytes

• Morphologie: relativement arrondie, 20 à 30 µm, noyau central arrondi, nombreuses granulations cytoplasmiques.
• Cellules ubiquitaires, absentes du sang à l'état normal.
• Localisations préférentielles: tissus en contact avec le milieu extérieur et cavités séreuses de l'organisme.
• Genèse: précurseur hématopoïétique mastocytaire, migration dans le tissu conjonctif, durée de vie longue, représentent 2 à 8% de la population du derme, capables de se diviser par mitose.

Fonctions des mastocytes

• Hypersensibilité immédiate / réaction allergique de type 1: rhinite, urticaire, choc anaphylactique, asthme.
• Rôle de la dégranulation des mastocytes suite à la reconnaissance des allergènes par les IgE.
• Modulation des phases inflammatoires, et de la prolifération de fibroblastes et myofibroblastes.

Les leucocytes

• Trois familles: granulocytes (neutrophiles, éosinophiles, basophiles), monocytes/macrophages, lymphocytes.
• Interviennent dans la réaction inflammatoire par diapédèse.
• Capacité de phagocytose variable.

Les polynucléaires

• Possèdent un unique noyau lobé.
• Utilisés en routine pour les examens cytologiques.
• Comportent deux colorants: un colorant acide (éosine) et un colorant basique (bleu de méthylène).

Les polynucléaires neutrophiles (PNN)

• Les plus nombreux dans le sang circulant.
• Gagnent le tissu conjonctif par diapédèse.
• Peu d'organites et adaptés au métabolisme anaérobie.
• Devenir: absence de division.

Polynucléaires neutrophiles et réaction inflammatoire aigüe

• Arrivée des premiers PNN sur le site lésé quelques minutes après l'agression.
• Caractérise la phase aigüe de la réaction inflammatoire: phagocytose, destruction des bactéries et résorption des tissus lésés.

Les polynucléaires éosinophiles (PNE)

• Passage rapide dans les tissus.
• Localisés préférentiellement dans les tissus en relation avec le milieu extérieur.
• Ont pour but la destruction de l'agent infectieux notamment les parasites.
• Leucocytes pro-inflammatoires: font le production de cytokines.
• Modulation des réactions inflammatoires liées à l'allergie.

Les lymphocytes

• Petites cellules avec un noyau occupant 80 à 90% du volume cellulaire.
• Différenciation entre lymphocytes B et T par immunohistochimie contre les clusters de différenciation (CD).
• Maturation terminale = acquisition de récepteurs de reconnaissance antigénique dans les organes lymphoïdes.
• Circulation des lymphocytes dans le sang et passage dans différents tissus (tissu conjonctif et organes lymphoïdes).
• Activation des lymphocytes en réponse à un antigène.

Les plasmocytes

• Étape finale de maturation de LB ayant rencontré un antigène.
• Synthèse et sécrétion d'immunoglobulines dirigés contre l'antigène qui a activé le lymphocyte B.
• Morphologie typique d'une forte activité transcriptionnelle avec un noyau excentré et un cytoplasme coloré.

Système monocytes-macrophages

• Monocytes: 20 µm, noyau réniforme incisuré, cytoplasme vacuolisé.
• Macrophages: plus volumineux, cytoplasme vacuolisé, appareil vacuolaire important.
• Cellule souche hématopoïétique différenciation successive en monoblaste, promonocyte et en monocyte.

Système Monocytes-Macrophages : Différenciation et Transformation

• Macrophages des sinus des ganglions lymphatiques et de la rate: présentation des antigènes.
• Ostéoclastes: résorption du tissu osseux.
• Cellules de Küpffer: phagocytose des vieilles hématies.
• Microglie: dans le cerveau.
• Macrophages alvéolaires: nettoyage des alvéoles pulmonaires.

Fonctions des macrophages

• Interviennent dans les infections ou lors d'intrusion de particules étrangères.
• Rôle de sentinelles par activation par des cytokines pro-inflammatoires, et par leur capacité de phagocytose.
• Orchestrent le recrutement des autres cellules de défense par la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires.
• Coopération avec d'autres leucocytes et en particulier les polynucléaires neutrophiles qui phagocytent des bactéries et des débris tissulaires.

Leucocytes : Fonctions des Macrophages

• Deux types de macrophages : M1 et M2.
• Les M1 macrophages sont pro-inflammatoires et s'activent en cas de perturbation de l'homéostasie tissulaire.
• Les M2 macrophages sont anti-inflammatoires, favorisent la néovascularisation et la régénération.

La matrice extracellulaire

• Remplissage et cohésion assurés par les fibres et la substance fondamentale.
• Support physique résistant et protection par les enveloppes des organes.
• Rôles propres à la substance fondamentale: passage des molécules, stockage/réserve.

La substance fondamentale

• Gel matriciel hydraté, transparent, et visqueux.
• Composition: liquide extracellulaire (eau +++), glycosaminoglycanes.
• Réservoir de cytokines et facteurs de croissance.

Les glycosaminoglycanes (GAG)

• Caractérisés par de volumineux polysaccharides portant des charges négatives.
• Rôle dans la formation de protéoglycanes.

Grands groupes de GAG

• Hyaluronane (acide hyaluronique): Très abondant dans le tissu conjonctif lâche.
• Chondroïtine-sulfate, Dermatane-sulfate: Distribution respective selon les tissus.
• Héparane-sulfate: Présent au niveau des lames basales.
• Kératane-sulfate: Distribution respective selon les tissus.

Les hyaluronanes

• Support de fixation des chaines protéoglycanes sulfatés.
• Interaction avec les autres éléments du tissu conjonctif (CD44, Fibres de collagène et élastiques)
• À forte viscosité et lubrifiant, qui permet lubrification des articulations
• Résistance à la pression des tissus et absorption des chocs garce à la répulsion des charges negatives
• Mènage des voies de migrations cellulaires

Les proteoglycanes

• Constitution: GAG sulfatées +Protèine Centrale
• Disctinctions selon le taille: petite et grande
• distinction selon le localisation: extracellulee/interstitiels, intracellulaires, De surface cellulaire/Transmembranaires

Agrécane

• protéoglycane extracellulaire prédominant dans le cartilage.
• protéine centrale sur qui vient fixer manière covalent chaines de GAG sulfatés
• Interaction non covalente d'une centraine de monomères agrécane avce de Hyaluronan

Rôle des protéoglycanes extra-celullaires

• réseau moléculaire hydrophile d'amortisement des chocs
• ménage des voies de passages des cellules
• barrière qui s’oppose à la diffusion des agents pathogènes.

Glycoprotéines d'adhérence ou multi adhesives

• Rôles Adhérence cellule - matrice extra-cellulaire.
• Migration des cellules dans la matrice extra-cellulaire.
• Les différentes types sont Fibronectine, Laminine, Ostéopontine, Chondronectine

Les fibres conjonctives

• Système collagène
• Système élastique

Le système collagène

• Type de collagène du corps humain
• Différentes cellules produisent collagène
• organisation des collagènes, collagènes fibrillaires et Fibres

Fibres de réticuline : collagène de type 3

• fibres colorées en noir par imprégnation argentique
• Organes et charpentes

Les fibres de collagène de type 1

• Organisation et propriétés de la matière fibreux de types 1
• distribution dans plusieurs tissus de soutiens (peu, os, dents, tendo…)
• Pathologies
• Ostéogenèse imparfaite et fragilité de types variables

Les fibres élastiques

• Permettent amortissement de Pression des artères et l’extensibilité de tous les tissus
• Elastine
• Structure en Microfibrilles

Remodelage tissulaire dans un tissu conjonctif commun

• Maintien et changement transitoire de l’architecture cellulaire
• Mécanique d'adaptation à des nouvelles contraintes.
• équilibre et intervention de plusieurs cellules

LAMES BASALES

• Située à l'interface entre certains types de cellules et les tissus conjontifs ( epithéliéles, musculaires, adipeuses,Schwann)
• Epaisseur Variable
• Glycoprotéines collagéniqueset non colagéniques
• protéoglycanes

LAMES BASALES : VISUALISATIONS

• Visualisation des lames basales possible par Microscopique par le colration +Anit Corps

Lames Basales Fonctions

• Permet interloieraison entre tissu épithéliale et conjonctive
• Transmission bisirectione des Informations
• pathologie au dommage de type VII

Lames Basales: Fonctions

• Nutrition des épithéliums et filtation: Ultrafiltration des plasma sanguin
• 3 couches

Lame basale et progression tumorale

• Permet amarriage de la cellule épithéliée
• Transformation par les cellules
• Prolifération
• Survie
• Frachissement
• Extension du processus tumoral: formation de métasis

Les differents types de tissus conjonctifs

• Tissus conjonctifs à prédominance de substance Fondamentales: Riches en hyaluronanes
• Tissus conjonctifs Prédominance de Fibres : Tissus Conjonctifs a predominance de tissu élastique, conjontif, tissu cartilagineuses