Extração do Pâncreas e Modelos de Drosophila

É uma mistura enzimática comercialmente conhecida como liberase RI. É composta por colagenase e tripsina e é usada para a degradação eficiente do tecido exócrino, mantendo o tecido endócrino intacto durante o processo de isolamento.

A liberase é injetada lentamente no pâncreas até que ele esteja completamente distendido. É importante parar a injeção antes que todo o conteúdo da seringa seja usado para evitar danos ao órgão.

Após a injeção da liberase, o pâncreas é cuidadosamente separado dos órgãos vizinhos, como o estômago, intestino e baço. O tecido adiposo é removido para garantir um isolamento preciso.

Depois da dissecação, o pâncreas é lavado com solução de isolamento e colocado em um tubo de Falcon, que é mergulhado em um banho termostatizado a 37ºC. Essa temperatura promove a reação enzimática da liberase.

O tubo é agitado suavemente, evitando a fragmentação mecânica do pâncreas. A digestão enzimática dura entre 8 e 12 segundos. A reação é monitorada visualmente, observando a presença de pequenos fragmentos e a turbidez da solução.

Para garantir o sucesso do isolamento, todo o processo deve ser realizado rapidamente, em um período de 10 a 15 minutos, para evitar que as células entrem em hipóxia.

Durante todo o processo de isolamento, o abdômen do animal é regularmente umedecido com solução de isolamento, utilizando uma mistura de gelo e água, a fim de evitar a desidratação.

Estes modelos utilizam células tumorais do mesmo tipo de animal, criando um ambiente imune compatível. São usados para estudar crescimento tumoral, metástases e resposta à imunoterapia.

Modelagem in vitro que reproduz o local de origem do tumor, permitindo o estudo de sua proliferação e metástases no ambiente natural.

Modelos que reproduzem o processo de metástases, permitindo estudar a propagação do tumor para outras partes do corpo.

Utilizam células tumorais humanas implantadas em ratos imunodeficientes, permitindo um estudo mais próximo da doença em humanos.

Este modelo usa células B16-F10, agressivas e aptas a formar metástases, para estudar o melanoma e terapias contra ele.

Estas células mimetizam o cancro da mama humano em estádio avançado, sendo usadas no estudo deste tipo de tumor.

O modelo CT26, com células moderadamente imunogénicas, é útil para estudar a imunoterapia e a resposta do sistema imune.

A resposta do tumor ao tratamento em ratos pode não ser idêntica à de humanos, limitando a aplicabilidade dos resultados.

Utilizar linhagens endogâmicas pode não refletir a diversidade genética humana, limitando a previsão da resposta aos tratamentos.

O gene supressor de tumores mais frequentemente mutado em tumores humanos, TP53, foi encontrado mutado (tp53M214K) em peixes-zebra tratados com etilnitrosourea (ENU), levando ao desenvolvimento de tumores.

Os peixes-zebra mutantes tp53M214K desenvolvem tumores, particularmente em áreas como o olho e a cavidade abdominal.

Os oligonucleotídeos morpholino antisense (MOs) são ferramentas moleculares que se ligam a mRNA ou miRNA, bloqueando sua tradução ou levando a splicing alternativo, resultando em proteínas defeituosas.

CRISPR/Cas9 é um sistema de edição genética que usa um RNA guia para direcionar uma endonuclease (Cas9) para uma sequência específica de DNA, induzindo uma quebra dupla na cadeia. Isso pode levar a indels e perda de função do gene ou à inserção de um fragmento de DNA, levando a mutações específicas.

Peixes-zebra singênicos são criados a partir de embriões haplóides produzidos por fertilização com esperma irradiado com UV, seguido de indução da diploidia por pressão ou choque térmico.

As duas linhas de clones de peixes-zebra (CB1 e CW1) são amplamente usadas em pesquisas, permitindo o estudo da tumorigênese e metástase em um contexto geneticamente homogêneo.

A indução de tumores em peixes-zebra CB1 com N-nitrosodiethylamine (DEN) e o transplante de tecidos tumorais em peixes singênicos permitiram a criação de 19 linhas tumorais, oferecendo um modelo para pesquisas sobre biologia e terapia de tumores.

A criação de linhas de clones e modelos de transplante tumoral em peixes-zebra proporcionou um modelo experimental versátil para estudos em oncologia, abrindo caminho para pesquisas sobre mecanismos de tumor, descoberta de drogas e testes de terapias.

O uso de MOs, CRISPR/Cas9 e linhas de clones de peixes-zebra singênicos fornecem ferramentas poderosas para o estudo de doenças, como o câncer, em um contexto geneticamente controlado.

A Drosophila melanogaster, um tipo de mosca-da-fruta, é um modelo animal amplamente utilizado em pesquisas sobre a doença de Parkinson (DP). Sua genética similar à dos humanos, facilidade de manipulação e ciclo de vida curto a tornam ideal para estudos sobre a DP.

A Drosophila melanogaster possui genes homólogos aos genes humanos relacionados à DP. Isso significa que esses genes possuem funções semelhantes nos dois organismos, permitindo a investigação da função desses genes na doença.

A Drosophila melanogaster possibilita a manipulação genética precisa. Por exemplo, a expressão de genes pode ser aumentada ou diminuída, ou genes podem ser modificados especificamente. Essa capacidade é fundamental para o estudo de genes relacionados à DP.

O sistema nervoso da Drosophila, embora mais simples, compartilha neurotransmissores importantes como a dopamina. Essa similaridade permite o estudo da degeneração neuronal dopaminérgica característica da DP.

A Drosophila melanogaster tem um ciclo de vida curto e exige baixo custo de manutenção. Essas características permitem experimentos de larga escala, incluindo testes de medicamentos e estudos da progressão da doença.

São modelos de ratinho que se focam na proteína tau, uma das proteínas chave envolvidas na doença de Alzheimer. Estes modelos tentam replicar a formação de emaranhados tau, que são agregados de tau que causam danos aos neurónios.

São modelos de ratinho criados através da manipulação genética, alterando o gene MAPT, que é responsável por produzir a proteína tau. Estes modelos podem ajudá-los a compreender como mutações no gene tau podem levar à doença de Alzheimer.

São modelos de ratinho que se baseiam na injeção de tau patológico no cérebro, a fim de imitar a propagação da doença. Estes modelos podem ajudar a investigar como a tau se espalha entre neurónios e causa danos.

São modelos de ratinho que usam DNA recombinante para introduzir genes que codificam a proteína tau, permitindo que a proteína produzida seja regulada de acordo com a necessidade do estudo.

Os primatas não-humanos são animais muito úteis para estudar o envelhecimento normal e a acumulação de Aβ, que são características importantes do desenvolvimento da doença de Alzheimer. Estes animais podem servir como modelos para testar novos medicamentos destinados a atrasar ou prevenir a doença.

A proteína Aβ e a proteína tau são muito semelhantes entre os primatas e os humanos. Esta semelhança torna os primatas modelos muito úteis para estudar as bases moleculares da doença de Alzheimer.

A doença de Alzheimer é caracterizada por uma acumulação anormal de Aβ e tau no cérebro. Enquanto os primatas desenvolvem placas Aβ com a idade, a acumulação de tau e os danos neurológicos associados à doença de Alzheimer só ocorrem nos humanos.

Apesar de não replicar completamente a doença de Alzheimer, os primatas não-humanos são modelos valiosos para o estudo do envelhecimento normal e da acumulação de Aβ. Esta semelhança com humanos os torna úteis para testar medicamentos e diagnósticos que visam a acumulação de Aβ.

O estudo da doença de Alzheimer em primatas não-humanos fornece insights relevantes para o desenvolvimento de novos tratamentos. Apesar das diferenças na acumulação de tau, as semelhanças na acumulação de Aβ, nos mecanismos de envelhecimento e no comportamento abrem caminho para estratégias promissoras para combater esta doença.