Diagnostic des Mutations d'Épissage

Splicing et Diagnostic des Mutations d'Épissage

• Plus de 50% des gènes humains subissent un épissage alternatif.
• La fonction des protéines peut être altérée, notamment par la perte de domaines essentiels.
• La traduction et la stabilité de l'ARNm peuvent être modifiées par l'épissage alternatif.

Diagnostic des Mutations d'Épissage: Syndrome d'Ehlers-Danlos

• Maladie dominante du tissu conjonctif, provoquant une cicatrisation anormale, une peau et des articulations hypermobiles, ainsi qu'une fragilité accrue.
• Implique le gène COL5A1, codant pour le collagène de type V.
• L'architecture des fibrilles de collagène est anormale.
• Une mutation se situe dans le site accepteur d'épissage, spécifiquement IVS4-2A-G au début de l'exon 5.
• Les séquences GT (5'; donneur) et AG (3'; accepteur) sont cruciales pour l'épissage correct.

Production d'ADNc et Mutation de l'Accepteur d'Épissage IVS4-2A-G

• La mutation IVS4-2A-G active un site accepteur cryptique lors de l'épissage.

Diagnostic en Laboratoire: Chorée de Huntington

• Maladie neurodégénérative autosomique dominante qui se manifeste généralement après 30 ans.
• Des répétitions de (CAG)n dans l'exon 1 codent pour la polyglutamine, conduisant à des agrégats amyloïdes de huntingtine mutée.
• Entraîne une perte de fonction des neurones GABAergiques.
• Manifestations incluent des troubles du mouvement et des problèmes psychiques.
• L'amplification par PCR est une méthode de diagnostic.
• Les individus sains présentent 1, 2, 6 ou 10 répétitions des bases.
• Les patients présentent 3, 4, 5, 7, 8 ou 9 répétitions des bases.
• La maladie peut se déclarer durant la jeunesse.
• L'anticipation, où les générations suivantes développent la maladie à un âge plus jeune, est observée.

Diagnostic en Laboratoire: Dystrophie Myotonique

• Maladie autosomique dominante.
• Expansion de répétitions de trinucléotides (CTG)n dans la région 3' UTR du gène DMPK.
• DMPK code pour une protéine kinase dystrophique myotonique exprimée dans les cellules musculaires.
• La fonction de la myotonine protéine kinase est diminuée, causant des dommages à la membrane des fibres musculaires.
• Les répétitions CUG dans l'ARNm séquestrent les protéines de liaison à l'ARN.
• Les répétitions CTG modifient la structure de la chromatine locale et l'expression des gènes.
• Le traitement de l'ARNm est altéré, entraînant une réduction de la protéine Dmpk.
• Trois générations peuvent être touchées.
• Le nombre de répétitions varie, allant de 10 à 1000 unités.
• L'analyse par Southern Blot d'ADN digéré avec EcoRI est utilisée.
• Une bande normale se situe à 9 et 10 kb.
• Le grand-père présente une bande de 10 kb légèrement plus longue.
• La fille a un fragment de 10kb significativement plus long.
• La fille présente une dystrophie myotonique classique.
• Le fils présente une expansion importante avec une forme congénitale grave.

Diagnostic en Laboratoire: Syndrome de l'X Fragile

• Caractérisé par un retard mental.
• Associé à l'autisme et à l'épilepsie.
• Inclut des caractéristiques physiques telles que de grandes oreilles, un long visage et des troubles de la parole.
• L'analyse cytogénétique est complexe, coûteuse et a un taux élevé de faux positifs.
• Est lié à un tremblement/ataxie associé à l'X fragile.
• Est lié à des pré-mutations (PM), comprenant des répétitions de [CGG]n dans la région 5' UTR de l'exon 1.
• La longueur des séquences répétées peut être déterminée par PCR ou Southern blot.
• La PCR ne renseigne pas sur l'état de méthylation.
• Le Southern blot ne détecte pas les petits changements.
• Une mutation complète (FM) peut impliquer de très grandes unités de répétition.
• De très grandes unités de répétition peuvent ne pas être détectés par PCR.

Methylation de l'ADN et Expression Génique

• La méthylation de l'ADN conduit à la répression de l'expression génique au niveau de la chromatine.
• La chromatine active est généralement non méthylée et les histones sont acétylées.
• La chromatine inactive est méthylée et les histones sont désacétylées.
• La condensation de la chromatine et de l'inactivation de la transcription.
• Des amorces rouges ou vertes sont utilisées.
• La région CGG est marqué en bleu.

Tests de Dépistage en Groupe: Points Clés

• Un résultat positif doit mener à des mesures significatives et des traitements possibles.
• Le programme doit être socialement et éthiquement acceptable.
• L'information et le conseil doivent être disponibles pour les sujets sans discrimination ni pression indue vers des actions spécifiques.
• Le test doit être sensible et très spécifique.
• Les faux positifs entraînent une anxiété inutile.
• Le bénéfice doit dépasser les coûts, en évitant le gaspillage des ressources de santé.

Dépistage Non Pertinent: Chorée de Huntington

• 3 à 7 porteurs pour 100 000 personnes.
• Se manifeste en moyenne vers l'âge de 40 ans.
• Il n'existe aucun traitement ni prophylaxie.
• Le test est presque 100% spécifique et très sensible.

Dépistage Pertinent: Phénylcétonurie

• Trouble métabolique autosomique récessif.
• Touche 1 naissance sur 6 000.
• Défaut de l'hydroxylase de phénylalanine.
• Le métabolisme de la phénylalanine est impossible.
• Entraîne un déficit en tyrosine et une accumulation de produits de dégradation alternatifs (phénylcétones).
• La tyrosine est nécessaire à la synthèse de la dopamine et des hormones thyroïdiennes.
• La carence en tyrosine peut entraîner un retard de développement intellectuel ou épilepsie.
• Requiert une diète à vie pauvre en phénylalanine (sans viande, poisson, fromage).
• La tyrosine est ajoutée comme supplément nutritionnel.
• Un dépistage est effectué chez les nouveau-nés.
• Utilise les méthodes enzymatiques, HPLC et les tests génétiques.