Biologie - Primární protilátky a techniky

Study Notes

Primární protilátka se aplikje s navázanou značkou; užitečná pro elektronovou mikroskopii, ale ne pro světelnou.
Nepřímá metoda zahrnuje sendvičovou techniku, kdy se na antigen naváže neznačená primární protilátka a na její Fc fragment se naváže značená sekundární protilátka.
Trojstupňová nepřímá metoda využívá komplex avidin-biotin (ABC), kdy avidin váže biotin a následně se sekundární protilátka váže na tento komplex označený peroxidázou.

Odběr vzorku z čerstvé tkáně (cca 1 mm³).
Fixace, často dvojitá, pomocí aldehydových roztoků jako formaldehyd či glutaraldehyd.
Zálivání do umělých pryskyřic, jako epoxidové, metakrylátové.
Krájení na polotenké a ultratenké řezy (40-60 nm) pomocí mikrotomu, zachycení na síťkách (měděné, niklové, zlaté) s uhlíkovou vrstvou.

Buňka (cellula) je nejmenší stavební a funkční jednotka schopná samostatného života, poprvé popsána Robertem Hookem v roce 1665.
Klíčoví vědci T. Schwann a M. J. Schleiden přispěli k buněčné teorii v 19. století, která uvádí, že všechny organismy se skládají z buněk.
Interdigitace – vyčnívající výběžky jedné buňky zapadají do prohlubní jiných buněk, u buněk transportujících vodu.
Bazální labyrint – záhyby buněčné membrány obsahující mitochondrie pro energetickou produkci iontových pump.

Centrosom je hlavní MTOC většiny buněk, blízko jádra, obsahuje centrioly skládající se z 9 tripletů mikrotubulů.
Centrioly se zdvojují během replikace DNA, kolmo uspořádané v interfázi.
Jádro je obklopeno jadernou membránou, obsahuje genetickou informaci, kterou tvoří chromatin, jadérko a jaderný obal.

DNA se skládá ze dvou polynukleotidových řetězců uspořádaných do dvoušroubovice.
Nukleosom je stavební jednotkou chromatinu, tvořen 8 histony a dvakrát ovinutou molekulou DNA.
Segment DNA s histonem H1 tvoří spojnici mezi nukleosomy, což vytváří chromatinovou fibrilu o průměru 30 nm.
Heterochromatin a euchromatin se liší podle stupně kondenzace, chromatin se v profázi kondenzuje do chromosomů.