Biologie: Bakterielle Konjugation

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Questions and Answers

Welcher Faktor ist entscheidend für die gerichtete Übertragung von DNA bei der Konjugation?

  • Die DNA-Polymerase
  • Das Cytoplasma der Bakterien
  • Die Ribosomen
  • Der Fertilitätsfaktor (correct)

Was beschreibt einen Hfr-Stamm während der Konjugation?

  • Ein Bakterium, dessen Fertilitätsfaktor in sein Genom integriert ist (correct)
  • Ein Bakterium mit einem Fertilitätsplasmid ohne zusätzliche Gene
  • Ein Bakterium ohne Fertilitätsfaktor
  • Ein Bakterium, das keine DNA übertragen kann

Wie erfolgt die DNA-Übertragung zwischen Bakterienzellen während der Konjugation?

  • Über Plasmabrücken (correct)
  • Durch endozytische Prozesse
  • Durch Osmose
  • Über aktive Transportmechanismen

Welche Eigenschaft haben F+ Bakterien im Vergleich zu F- Bakterien?

<p>F+ Bakterien besitzen ein Fertilitätsplasmid (D)</p> Signup and view all the answers

Was passiert zufällig während der Phagenvermehrung in einer Bakterienzelle?

<p>Ein Stück der Bakterien-DNA wird in einen Phagen eingebaut (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion haben Restriktionsenzyme innerhalb der Gentechnologie?

<p>Sie schneiden DNA an spezifischen Stellen. (A)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Rolle von Ligasen in der Gentechnologie?

<p>Sie verbinden DNA-Fragmente. (C)</p> Signup and view all the answers

Warum sind Mikroorganismen ideale Klonierungswirte?

<p>Sie lassen sich leicht kultivieren. (C)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt die Funktion von Vektoren oder Plasmid-DNA in der Gentechnologie?

<p>Sie fungieren als Genfähren zur Übertragung von DNA. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Aussage zu den Typen von Restriktionsenzymen ist korrekt?

<p>Typ III schneidet etwa 20 bis 25 Basenpaare von der Erkennungssequenz entfernt. (A)</p> Signup and view all the answers

In welchem Prozess sind Klonierungen hauptsächlich beteiligt?

<p>Genübertragung und Selektion. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Rolle spielen DNA-Transfermethoden in der Gentechnologie?

<p>Sie gewährleisten den Transfers von genetischem Material. (C)</p> Signup and view all the answers

Welches Merkmal ist nicht typisch für Restriktionsenzyme Typ II?

<p>Sie schneiden DNA zufällig ohne festgelegte Position. (C)</p> Signup and view all the answers

Was geschieht mit der DNA der toten S-Zellen während der Transformation?

<p>Sie wird von den R-Zellen aufgenommen. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist eine Voraussetzung, um genetischen Austausch nachzuweisen?

<p>Es sind Merkmalsunterschiede erforderlich. (B)</p> Signup and view all the answers

Welches ist der erste Schritt im Prozess der chemischen Transformation kompetenter Bakterien?

<p>Inkubation auf Eis. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Beschreibung trifft auf eine kompetente Zelle zu?

<p>Sie kann DNA leicht aufnehmen. (C)</p> Signup and view all the answers

Wie lange sollte die Inkubation auf Eis während der chemischen Transformation dauern?

<p>30 Minuten (A)</p> Signup and view all the answers

Was ist der Effekt eines Hitzeschocks auf die kompetenten E.coli-Zellen?

<p>Er erleichtert die DNA-Aufnahme. (C)</p> Signup and view all the answers

Was wird benötigt, nachdem die dabielle Zellen einem Hitzeschock ausgesetzt wurden?

<p>Die Zugabe von selektivem Medium. (B)</p> Signup and view all the answers

Was passiert mit der DNA, wenn die Zelle lysiert wird?

<p>Die DNA wird durch die Zellwand austreten. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Hauptfunktion von Klonierungsplasmiden?

<p>Ligation von neuen Sequenzen und deren Vermehrung (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Elemente sind typischerweise in einem Klonierungsvektor enthalten?

<p>Ein Origin of replication und ein Selektion Marker (C)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt den Prozess der Transformation in Bakterien?

<p>Die Aufnahme freier DNA aus der Umwelt (C)</p> Signup and view all the answers

In Griffiths Experimenten, was geschah, als lebende R-Zellen mit toten S-Zellen kombiniert wurden?

<p>Die lebenden S-Zellen konnten isoliert werden. (D)</p> Signup and view all the answers

Was ist eines der Hauptmerkmale eines Expressionsplasmids?

<p>Es ist optimiert für die Expression von neuen Sequenzen. (C)</p> Signup and view all the answers

Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung von einer Bakterienzelle zu einer anderen über Zellkontakte?

<p>Konjugation (B)</p> Signup and view all the answers

Welches dieser Elemente hat nicht die Funktion eines Selektionmarkers?

<p>Ein gen, das keine klare Identifikation von Transformanten ermöglicht (B)</p> Signup and view all the answers

Was haben Resistenz-(R-)Plasmide gemeinsam?

<p>Sie enthalten Gene, die gegen Antibiotika oder Gifte resistent sind. (D)</p> Signup and view all the answers

Was ist eine charakteristische Eigenschaft von Plasmiden im Vergleich zu Chromosomen?

<p>Sie replizieren sich unabhängig von der Haupt-DNA. (A)</p> Signup and view all the answers

Welcher der folgenden Schritte ist kein Teil der Klonierung eines Gens?

<p>Übersetzung des Klonierten Gens in ein Protein. (C)</p> Signup and view all the answers

Was passiert bei der Verwendung von Taq-Polymerase während der PCR, wenn keine Restriktionsschnittstellen hinzugefügt werden?

<p>Ein A wird an das 5'-Ende des PCR-Produkts angefügt. (A)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Elemente enthält kein Fruchtbarkeitsplasmid?

<p>Antibiotika-Resistenzgene. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche undurchsichtige DNA-Sequenz ist wahrscheinlich am besten geeignet, um eine Restriktionsschnittstelle zu erstellen?

<p>5<code>-GAATTC-3</code> (D)</p> Signup and view all the answers

Wie nennt man die Technik des Einfügens von DNA-Fragmenten in Plasmide?

<p>Ligation. (C)</p> Signup and view all the answers

Welches Enzym wird oft verwendet, um PCR-Produkte zu amplifieren?

<p>Taq Polymerase. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Aussage beschreibt am besten Plasmide?

<p>Sie können Gene für die Antibiotika-Resistenz tragen. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion erfüllt ein Primer in der PCR?

<p>Er dient als Startpunkt für die DNA-Synthese. (D)</p> Signup and view all the answers

Bei welchem Schritt in der Klonierung wird das rekombinierte Plasmid erzeugt?

<p>Bei der Ligation. (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion haben Primer in der PCR?

<p>Sie sind Startpunkte für die DNA-Polymerase. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist ein Hauptkriterium für die Auswahl von Primern?

<p>Die Schmelztemperatur sollte zwischen 65°C und 70°C liegen. (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Temperatur wird beim Denaturierungsprozess der PCR verwendet?

<p>95°C (C)</p> Signup and view all the answers

Wie viele Nukleotide sollten Primer idealerweise lang sein?

<p>18-30 Nukleotide (C)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Elemente ist kein Bestandteil eines typischen PCR-Reaktionsansatzes?

<p>Proteine zur Stabilisierung (B)</p> Signup and view all the answers

Was geschieht in der Annealing-Phase der PCR?

<p>Die Primer binden an die DNA-Template. (D)</p> Signup and view all the answers

Was bewirkt eine hohe G-C-Basenpaarung in einem Primer?

<p>Erhöht die Stabilität des Primers durch Wasserstoffbrücken. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist der Zweck der Ligation in einem Klonierungsprozess?

<p>Die Enden von Vektoren und Restriktionsprodukten werden verbunden. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaften sind wichtig für die Primer-Dimer-Bildung zu vermeiden?

<p>Komplementäre Rückfaltungen in der Struktur. (D)</p> Signup and view all the answers

Welches Element ist während der Elongierungsphase in der PCR entscheidend?

<p>DNA-Polymerase (A)</p> Signup and view all the answers

Was geschieht während der Denaturierung in der PCR?

<p>Die DNA-Stränge werden getrennt. (C)</p> Signup and view all the answers

Wie lange sollte die annealing Temperatur im Verhältnis zur Schmelztemperatur liegen?

<p>10-15°C niedriger (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion hat die Elektrophorese in der PCR?

<p>Die Größe der DNA-Fragment wird bestimmt. (B)</p> Signup and view all the answers

Wie schützt die DNA der Bakterien ihre eigene genetische Information gegen Bakteriophagen?

<p>Durch Methylierung spezifischer DNA-Stellen. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion haben DNA-Methyltransferasen in Bakterien?

<p>Sie kennzeichnen genetische Sequenzen zur Verteidigung. (D)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt am besten die Struktur von Restriktionsenzymen?

<p>Sie sind Dimere mit anpassungsfähiger Struktur. (B)</p> Signup and view all the answers

Was sind Isoschizomere in Bezug auf Restriktionsenzyme?

<p>Enzyme mit identischen Erkennungssequenzen, aber unterschiedlichen Enden. (A)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Elemente wird nicht von Restriktionsendonukleasen erkannt?

<p>Methylierte DNA. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen über Restriktionsenzyme ist korrekt?

<p>Sie spalten die DNA an spezifischen Erkennungssequenzen. (D)</p> Signup and view all the answers

Wie werden klebrige Enden bei der Restriktion erzeugt?

<p>Durch spezifische Schnitte der Restriktionsenzyme. (C)</p> Signup and view all the answers

Was passiert, wenn zwei Restriktionsenzyme unterschiedliche spezifische Erkennungssequenzen erkennen?

<p>Sie produzieren inkompatible Enden. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Erkennungssequenzen von Restriktionsenzymen vom Typ II?

<p>Sie sind meist palindromisch und bestehen aus vier, sechs oder acht Basenpaaren. (C)</p> Signup and view all the answers

Welches der folgenden Restriktionsenzyme ist aus Bacillus amyloliquefaciens isoliert?

<p>Bam HI (B)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?

<p>Sie durchtrennen DNA an spezifischen Stellen. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaft wird bei der Nomenklatur von Restriktionsenzymen verwendet?

<p>Der Herkunftsorganismus und die Reihenfolge der Entdeckung. (D)</p> Signup and view all the answers

Warum sind palindromische Erkennungssequenzen für Restriktionsenzyme wichtig?

<p>Sie garantieren eine spezifische und präzise DNA-Durchtrennung. (C)</p> Signup and view all the answers

Welches Merkmal ist charakteristisch für Plasmide?

<p>Sie replizieren sich unabhängig von der Haupt-DNA. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Enzyme werden verwendet, um PCR-Fragmente mit zusätzlichen Restriktionsschnittstellen zu versehen?

<p>Restriktionsenzyme (B)</p> Signup and view all the answers

Was geschieht während der Ligationsphase im Klonierungsprozess?

<p>Fragmente werden aneinandergefügt, um rekombinierte DNA zu bilden. (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaft hat Taq Polymerase in Bezug auf PCR?

<p>Sie fügt ein 'A' an das 3'-Ende von Fragmenten an. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Art von Plasmid enthält ausschließlich Fertilitätsgene?

<p>Fruchtbarkeitsplasmid (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?

<p>Sie schneiden DNA an spezifischen Stellen. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche Rolle spielt ein Primer während der PCR?

<p>Er bindet an die Ziel-DNA und initiiert die Amplifikation. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist das Ziel der TA-Zwischenklonierung?

<p>Erstellung von rekombinanter DNA ohne Restriktionsenzyme. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Verwendung von Plasmide in der Gentechnologie?

<p>Sie tragen oft Resistenzgene, um die Bakterien zu verbessern. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaft wird in der PCR-Phase des Annealing genutzt?

<p>Die Primer binden an die Ziel-DNA. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Aussage beschreibt am besten die Funktion eines Selektionmarkers in Klonierungsplasmiden?

<p>Er dient zur Identifizierung der Zellen mit rekombinierter DNA. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche Eigenschaft ist typisch für Klonierungsplasmide?

<p>Sie haben einen Origin of Replication (ORI), um die Replikation zu starten. (C)</p> Signup and view all the answers

Was ist der Hauptunterschied zwischen einem Klonierungsplasmid und einem Expressionsplasmid?

<p>Expressionsplasmide sind speziell für die Expression neuer Sequenzen optimiert. (C)</p> Signup and view all the answers

Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung mittels eines Virus?

<p>Transduktion (B)</p> Signup and view all the answers

Was passiert mit lebenden R-Zellen, wenn sie mit toten S-Zellen kombiniert werden?

<p>Die R-Zellen gewinnen eine Kapsel und werden pathogen. (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Methode zur genetischen Übertragung involviert Zell-Zell-Kontakte?

<p>Konjugation (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion hat der Polylinker oder die Multiple Cloning Site (MCS) in einem Klonierungsvektor?

<p>Sie enthält viele Restriktionsenzym-Erkennungssequenzen. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Aussagen trifft auf die Bedeutung der Transformation zu?

<p>Sie erfolgt durch die Aufnahme freier DNA durch Bakterien. (D)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt am besten die rekombinante DNA-Technologie?

<p>Die gezielte Neukombination von Erbinformation. (B)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Methoden gehört nicht zur Gentechnik?

<p>Klassische Züchtungsverfahren. (A)</p> Signup and view all the answers

Was ist eine der Hauptanwendungen von CRISPR/Cas9?

<p>Gezieltes Genome Editing in eukaryotischen Zellen. (C)</p> Signup and view all the answers

Warum darf seit 2018 die Gentechnik nicht in die Keimbahn eingreifen?

<p>Der Gesetzgeber hat dies aus ethischen Gründen beschlossen. (C)</p> Signup and view all the answers

Welche der folgenden Optionen beschreibt die Funktion von CRISPR/Cas in der Natur?

<p>Es bietet erworbene Immunität gegen Viren. (B)</p> Signup and view all the answers

Was bezeichnet man als somatische Gentherapie?

<p>Modifikation von somatischen Zellen zur Behandlung von Krankheiten. (A)</p> Signup and view all the answers

Welches dieser Verfahren wird als nicht gentechnisch angesehen?

<p>Übertragen von Embryonen auf Leihmütter. (A)</p> Signup and view all the answers

Was ist eine der Hauptschwierigkeiten bei der Verwendung von CRISPR/Cas9-Technologie?

<p>Ethische Bedenken hinsichtlich von Keimbahnmanipulationen. (B)</p> Signup and view all the answers

Was ist die Funktion des LacZ-Gens im Lac-Operon?

<p>Es kodiert für β-Galactosidase. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Rolle spielt IPTG im Lac-Operon?

<p>Es fungiert als Induktor der LacZ-Expression. (C)</p> Signup and view all the answers

Was zeichnet eine blaue Kolonie bei der Blau-Weiß-Selektion aus?

<p>Die Kolonie produziert β-Galactosidase. (C)</p> Signup and view all the answers

Was ist ein charakteristisches Merkmal des Operon-Modells?

<p>Es kodiert für mehrere Gene in einem einzigen Transkript. (D)</p> Signup and view all the answers

Welche Aussage trifft am besten auf die Funktion des β-Galactosidase zu?

<p>Es katalysiert den Abbau von Laktose in Glukose und Galactose. (A)</p> Signup and view all the answers

Wie wird ein Insert innerhalb des Plasmids nachgewiesen?

<p>Durch den Ausfall der β-Galactosidase-Aktivität. (A)</p> Signup and view all the answers

Was beschreibt den Prozess der allgemeinen Transduktion?

<p>DNA-Übertragung durch virulente Bakteriophagen. (A)</p> Signup and view all the answers

Welche Funktion hat der Repressor im Lac-Operon?

<p>Er inhibiert die Transkription des LacZ-Gens. (B)</p> Signup and view all the answers

Was genau wird bei der Blau-Weiß-Selektion beobachtet?

<p>Die Färbung von Kolonien basierend auf dem Insert. (D)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Restriktionsenzyme

Enzyme, die DNA an bestimmten Stellen schneiden, wie genetische Scheren.

Vektor-DNA

DNA-Moleküle, die als Transportmittel für fremde DNA dienen (Genfähren).

Plasmid

Kleine, ringförmige DNA-Moleküle in Bakterien, häufig als Vektor in der Gentechnik verwendet.

Ligasen

Enzyme, die DNA-Bruchstücke verbinden, wie genetischer Kleber.

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Embryoteilung

Die Teilung einer befruchteten Eizelle (Zygozien) zu einem Mehrzeller-Embryo.

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Embryotransfer

Die Übertragung eines Embryos in eine andere weibliche Trägerin.

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Klonieren

Herstellung von genetisch identischen Kopien eines Gens oder Organismus.

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Mikroorganismen

Kleine Lebewesen, wie Bakterien, die in der Gentechnik verwendet werden.

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Spender-DNA

DNA, die man in ein anderes Organismus einfügen will, um z.B. ein Gen oder Sequenz zu verändern.

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PCR: Polymerase-Kettenreaktion

Methode zum Vervielfältigen spezifischer DNA-Sequenzen in-vitro.

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Primer (PCR)

Oligonukleotide, die als Startpunkt für DNA-Polymerase dienen, definieren den zu kopierenden DNA-Bereich.

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Schmelztemperatur (Primer)

Temperatur, bei der Primer von der DNA ablösen; sollte 65-70°C betragen.

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Annealing (PCR)

Primer binden an die Ziel-DNA-Sequenz bei niedriger Temperatur (54-63°C).

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Elongierung (PCR)

DNA-Polymerase fügt Nukleotide an die Primer an und verlängert so die DNA-Stränge.

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Denaturierung (PCR)

DNA-Doppelstrang wird durch Hitze (95°C) getrennt.

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PCR-Zyklus

Abfolge von Denaturierung, Annealing und Elongierung, die wiederholt wird, um die DNA-Sequenz zu vervielfältigen.

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Elektrophorese

Methode zum Trennen von DNA-Fragmenten nach Größe.

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EcoR1

Ein Restriktionsenzym, das DNA an einer spezifischen Sequenz schneidet.

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BamH1

Ein weiteres Restriktionsenzym mit einer anderen Zielsequenz als EcoR1.

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Plasmid

Kleine, ringförmige DNA-Moleküle in Bakterien, die sich unabhängig vom Chromosom replizieren.

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Ligation

Ein Prozess, bei dem DNA-Fragmente durch Enzyme aneinandergefügt werden.

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PCR-Fragment

Ein DNA-Abschnitt, der durch Polymerasekettenreaktion (PCR) erzeugt wurde.

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Restriktionsfragment

Ein DNA-Abschnitt, der durch Restriktionsenzyme gewonnen wurde.

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TA-Zwischenklonierung

Eine Methode, bei der ein zusätzliches Adenin (A) am 3'-Ende eines DNA-Fragments angehängt wird, um die Ligation zu erleichtern.

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Taq-Polymerase

Ein Enzym, das DNA-Fragmente kopieren kann und ein A an das 3´ Ende anhängt.

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Resistenzgene (Plasmide)

Gene auf Plasmiden, die Bakterien bestimmten Umwelteinflüssen widerstehen helfen.

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Spender-DNA

Die DNA, die in einen anderen Organismus eingefügt werden soll.

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Klonieren eines Gens

Die Herstellung einer grossen Anzahl von identischen Kopien eines Gens.

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Zweck von Restriktionsschnittstellen?

Zusätzliche Schnittstellen für Restriktionsenzyme, ermöglichen eine präzise Einlagerung des Fragments in einem Plasmid.

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Plasmid - Funktion

Kleine, ringförmige DNA-Moleküle in Bakterien, die Resistenz gegen Antibiotika, die Vermehrung von Sequenzen oder die Expression von neuen Sequenzen ermöglichen.

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Klonierungsplasmid

Ein Plasmid, das hauptsächlich zur Einlagerung und Vermehrung neuer DNA-Sequenzen verwendet wird.

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Expressionsplasmid

Ein Plasmid, das für die Expression von neuen DNA-Sequenzen optimiert ist.

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Resistenz-Plasmid

Plasmid, das Resistenzgene gegen Antibiotika oder Gifte enthält.

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Replikationsursprung (ORI)

Spezifische DNA-Sequenz, die den Start der Replikation markiert.

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Selektionsmarker

Gene, die die Auswahl von Zellen ermöglichen, in denen sich die rekombinierte DNA befindet.

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Multiple Cloning Site (MCS)

Region im Plasmid mit vielen Restriktionsenzym-Erkennungssequenzen.

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Transformation (Genetik)

Aufnahme von freier DNA durch eine Bakterienzelle.

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Konjugation (Genetik)

Übertragung von Genen zwischen Bakterienzellen durch Zell-Zellkontakt und Plasmide.

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Transduktion (Genetik)

Übertragung von Genen durch einen Virus von einer Zelle zu einer anderen.

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Transformation (in Bakterien)

Aufnahme von freier DNA durch eine Bakterienzelle, die dadurch verändertes genetisches Material erhält.

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S-Zelle

Bakterielle Zelle, die eine Kapsel bildet

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R-Zelle

Bakterielle Zelle, die keine Kapsel bildet, empfängt DNA

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Kompetenz (Bakterien)

Fähigkeit einer Zelle, fremde DNA aufzunehmen.

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Chemisch Kompetenz

Herstellung der Kompetenz einer Zelle durch chemische Verfahren.

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Hitzeschock

Kurze Behandlung mit erhöhter Temperatur (37-42°C), um die DNA-Aufnahme zu verbessern.

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Merkmalsunterschiede

Merkmale (z.B. Aussehen, Resistenz gegen Antibiotika), welche zur Unterscheidung von Bakterien genutzt werden können.

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Phagenvermehrung

Ein Prozess, bei dem ein Virus (Phage) eine Bakterienzelle infiziert und vermehrt wird.

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Konjugation

Der Prozess, bei dem Bakterien DNA über Plasmabrücken austauschen.

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Fertilitätsfaktor

Ein genetisches Element, das die Konjugation ermöglicht und dabei die Richtung der DNA-Übertragung bestimmt.

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F+-Bakterium

Ein Bakterium, das den Fertilitätsfaktor besitzt und DNA an andere Bakterien weitergeben kann.

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F'-Bakterium

Ein Bakterium, das einen Fertilitätsfaktor mit zusätzlichen Genen besitzt.

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Hfr-Stamm

Ein Bakterium, bei dem der Fertilitätsfaktor in das Bakterien-Chromosom integriert ist.

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Plasmabrücke

Eine Verbindung zwischen zwei Bakterienzellen, über die die DNA übertragen wird.

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Was ist Gentechnik?

Die gezielte Veränderung des Erbguts von Organismen mithilfe moderner molekularbiologischer Methoden.

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Was sind die Hauptanwendungsgebiete der Gentechnik?

Herstellung von Proteinen für medizinische und technische Anwendungen, Produktion transgener Pflanzen und Tiere, Gendiagnostik und somatische Gentherapie.

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Was ist CRISPR/Cas9?

Eine Methode zur gezielten Veränderung von DNA-Sequenzen mithilfe eines bakteriellen Immunsystems.

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Was sind CRISPR/Cas-Systeme?

Ein natürliches Immunsystem von Bakterien, das zur Abwehr von Viren dient.

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Was ist das Besondere an CRISPR/Cas9 im Kontext der Gentechnik?

CRISPR/Cas9 ermöglicht die gezielte Veränderung von DNA-Sequenzen in eukaryotischen Zellen, z.B. bei Menschen.

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Warum unterliegt CRISPR/Cas9 seit 2018 dem Gentechnikgesetz?

Weil es Eingriffe in die Keimbahn ermöglicht und somit die genetische Ausstattung zukünftiger Generationen verändert werden könnte.

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Was zählt nicht zur Gentechnik?

Klassische Züchtungsverfahren, extrakorporale Befruchtung, Embryotransfer und zellbiologische Verfahren wie die Herstellung von Hybriden.

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Was ist der Unterschied zwischen klassischer Züchtung und Gentechnik?

Klassische Züchtung verändert das Erbgut indirekt durch Kreuzung und Selektion. Gentechnik greift direkt auf die DNA-Sequenzen ein.

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Restriktionsenzyme vom Typ II

Diese Enzyme schneiden DNA an einer bestimmten Sequenz, die palindromisch ist und meist vier, sechs oder acht Basenpaare lang ist. Sie fungieren wie molekulare Scheren.

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Nomenklatur von Restriktionsenzymen

Die Nomenklatur von Restriktionsenzymen gibt Aufschluss über ihre Herkunft. Der Name setzt sich aus Gattungsname, Artname, Stamm/Serotyp und der Reihenfolge der Entdeckung zusammen. Beispiel: EcoRI (Escherichia coli, Stamm R, 1. Enzym).

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Beispiele für Restriktionsenzyme

Es gibt eine große Anzahl von Restriktionsenzymen, z.B. EcoRI (schneidet an G‡AATTC), BamHI (schneidet an G‡GATCC) und HindIII (schneidet an A‡AGCTT).

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Funktion von Restriktionsenzymen

Restriktionsenzyme werden in der Gentechnik als molekulare Scheren eingesetzt, um DNA an genau definierten Stellen zu schneiden. Sie ermöglichen die präzise Manipulation von DNA-Sequenzen.

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Herkunft von Restriktionsenzymen

Restriktionsenzyme werden aus verschiedenen Organismen isoliert, z.B. aus Escherichia coli, Bacillus amyloliquefacies, oder Haemophilus influenzae.

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Bakteriophagenabwehr

Bakterien schützen sich vor Viren (Bakteriophagen) durch spezielle Enzyme, die die virale DNA schneiden.

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Restriktionsendonukleasen

Enzyme, die DNA an bestimmten Stellen schneiden. Sie sind wie molekulare Scheren, die virale DNA zerstören.

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DNA-Methylierung

Bakterien schützen ihre eigene DNA durch das Anbringen von Methylgruppen (-CH3). So werden die Schnittstellen für die Restriktionsendonukleasen blockiert.

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Isoschizomere

Verschiedene Restriktionsendonukleasen, die die gleiche Erkennungssequenz schneiden, aber unterschiedliche Enden produzieren.

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Glatte Enden

Restriktionsenzyme schneiden die DNA genau an der Erkennungssequenz, es entstehen stumpfe Enden.

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Klebrige Enden

Restriktionsenzyme schneiden die DNA so, dass eine kurze Sequenz übersteht. Diese "klebrigen" Enden können mit anderen kompatiblen Enden binden.

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Restriktionsenzym-Dimer

Die meisten Restriktionsenzyme bestehen aus zwei identischen Untereinheiten (Dimeren), die zusammenarbeiten, um die DNA zu schneiden.

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Erkennungssequenz

Spezifische Basensequenz auf DNA, die von einem Restriktionsenzym erkannt und geschnitten wird.

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Resistenz-(R-)Plasmide

Plasmide, die Gene für die Resistenz gegen Antibiotika oder Gifte tragen.

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Polylinker

Ein Bereich auf einem Plasmid, der viele Erkennungssequenzen für Restriktionsenzyme enthält.

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Transformation

Der Prozess, bei dem Bakterien freie DNA aus ihrer Umgebung aufnehmen.

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Ampicillin-Resistenz

Die Fähigkeit von Bakterien, dem Antibiotikum Ampicillin zu widerstehen. Dies wird durch ein Resistenzgen auf einem Plasmid ermöglicht.

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Lac-Operon

Eine funktionelle Einheit auf der DNA von Bakterien, die für die Regulation der Genexpression zuständig ist. Sie steuert die Produktion von Proteinen, die für den Abbau von Laktose benötigt werden.

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Repressor (Lac-Operon)

Ein Protein, das an den Operator des Lac-Operons bindet und die Transkription der LacZ-Gene blockiert. Dadurch wird die Produktion von β-Galactosidase verhindert.

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Induktor (Lac-Operon)

Eine Substanz, die an den Repressor des Lac-Operons bindet und ihn inaktiviert. Dadurch wird die Transkription der LacZ-Gene ermöglicht und die Produktion von β-Galactosidase gestartet.

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β-Galactosidase

Ein Enzym, das den Zucker Laktose spaltet. Es wird vom LacZ-Gen codiert und im Lac-Operon produziert.

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Blau-Weiß-Selektion

Eine Methode, um bakteriellen Kolonien mit rekombinanten Plasmiden zu identifizieren. Kolonien mit dem Insert sind weiß, Kolonien ohne Insert sind blau.

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X-Gal

Eine chemische Substanz, die von β-Galactosidase gespalten wird. Die Spaltungsprodukte führen zu einer blauen Farbe.

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MCS (Multiple Cloning Site)

Ein Bereich auf einem Plasmid, der eine Vielzahl von Restriktionsschnittstellen für verschiedene Restriktionsenzyme enthält. Damit können DNA-Fragmente leicht in das Plasmid eingefügt werden.

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Allgemeine Transduktion

Ein Prozess, bei dem Bakterien-DNA durch einen virulenten Bakteriophagen von einer Zelle zur anderen übertragen wird.

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Virulenter Bakteriophage

Ein Virus, der Bakterienzellen infiziert und vermehrt. Bei der Vermehrung kann bakterielle DNA in neue Phagen eingebaut und in andere Bakterien übertragen werden.

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Study Notes

Gentechnik - Definition

  • Gentechnik ist die Anwendung moderner molekularbiologischer Methoden zur Änderung der genetischen Eigenschaften von Organismen.
  • "Rekombinante DNA-Technologie" ermöglicht gezielte Re- bzw. Neukombination von Erbinformation.

Gentechnik - Anwendungsbereiche

  • Herstellung von Proteinen für medizinische und technische Anwendungen
  • Herstellung von transgenen Pflanzen und Tieren
  • Gendiagnostik
  • Somatische Gentherapie
  • CRISPR/Cas9 ist seit 2018 ebenfalls ein Bereich der Gentechnik.

CRISPR/Cas9

  • CRISPR/Cas9 ist ein weit verbreitetes Immunsystem bei Bakterien und Archaeen, das diese vor Phagen und Plasmiden schützt.
  • crRNAs (CRISPR-assoziierte kurze RNA) werden verwendet, um fremde Nukleinsäuren sequenzspezifisch zu deaktivieren.
  • tracrRNA (trans-codierte kleine RNA) lenkt die Reifung von crRNAs durch die Aktivität der konservierten RNase III und dem CRISPR-assoziierten Cas-Protein.
  • Diese Bestandteile sind essentiell für den Schutz vor fremden DNA.
  • Zwei CRISPR/Cas-Lokalisierungen (CRISPR1, CRISPR2) in Streptococcus pyogenes wurden identifiziert.

CRISPR/Cas: Erworbene Immunität von Bakterien

  • Spacer werden aus fremdem genetischem Material gewonnen und in den CRISPR-Array eingefügt.
  • Transkription und Verarbeitung von pre-crRNA zu crRNA.
  • Die Fremd-DNA wird gespalten und inaktiviert.

Werkzeuge der Gentechnologie

  • Spender-DNA (z.B. ein Gen oder eine bestimmte Nukleotidsequenz)
  • Vektor- oder Plasmid-DNA fungiert als Genfähren.
  • Restriktionsenzyme schneiden DNA wie „genetische Scheren“.
  • Ligasen kleben DNA wie „genetische Kleber“.
  • DNA-Transfermethoden transferieren die DNA.
  • Wirtsorganismen beherbergen den Vektor.

Klonieren

  • Ein Verfahren zur Herstellung genetisch identischer Kopien von DNA-Fragmenten.
  • DNA-Fragmente werden in Plasmide eingefügt, welche in Wirtszellen repliziert werden.
  • Selektion von Zellen, die das rekombinierte Plasmid enthalten.

Mikroorganismen in der Gentechnik

  • Ideale Mikroorganismen in der Gentechnik sind klein, vermehren sich schnell, ihr Genom ist manipulierbar, und sie sind leicht zu kultivieren.

Häufig verwendete Klonierungswirte

  • Escherichia coli: gut untersuchte Prokaryoten
  • Bacillus subtilis: einfach zu transformieren
  • Saccharomyces cerevisiae: gut untersuchte eukaryotische Organismen

Restriktionsenzyme

  • Typ I schneidet die DNA zufällig weit von der Erkennungssequenz entfernt (ATP erforderlich)
  • Typ II schneidet die DNA innerhalb oder direkt an der Erkennungssequenz (kein ATP erforderlich)
  • Typ III schneidet die DNA etwa 20-25 Basenpaare von der Erkennungssequenz entfernt (ATP erforderlich)
  • Typ II Restriktionsendonukleasen erkennen spezifische, oft palindromische, Sequenzen auf der DNA.
  • In der Praxis fungieren Restriktionsenzyme als genetische Scheren.

Nomenklatur der Restriktionsenzyme

  • Die Nomenklatur von Restriktionsenzymen umfasst die Gattungs- und Artnamen des Bakteriums, dem das Enzym entstammt, den Stamm und eine Nummer, die die Reihenfolge ihrer Entdeckung angibt (z.B., EcoRI).

Herkunft der Restriktionsenzyme

  • Bakterien verwenden Restriktionsenzyme, um sich gegen virale DNA zu verteidigen (Bakteriophagen).
  • Das Enzym spaltet die fremde DNA.

Bakterielle Methylierung

  • Bakterien schützen ihre eigene DNA durch Methylierung (Anfügen einer Methylgruppe).
  • Methylierung erfolgt im Bereich, wo es zur Spaltung by Restriktionsenzymes kommt.

Restriktionsenzyme sind Dimere

  • Restriktionsenzyme bestehen oft aus zwei Untereinheiten (Dimeren), die an die DNA angepasst sind.

Restriktion - Sticky Ends

  • DNA-Abschnitte mit „klebrigen Enden“ ergeben sich durch Restriktionsenzyme.
  • Diese Form der DNA hat komplementäre Einzelstrang-Aussparungen.

Restriktion - Glatte Enden

  • DNA-abschnitte mit glatten Enden ergeben sich durch Restriktionsenzyme.

Isoschizomere

  • Isoschizomere sind verschiedene Restriktionsenzyme, die dieselbe Erkennungs-Sequenz haben, aber unterschiedliche Spaltmuster erzeugen.

Klonieren eines Gens

  • Verfahren, ein Gen zu klonieren, indem Restriktionsenzyme verwendet werden, um ein Gen von einem Vektor zu erhalten.

PCR (Polymerase-Kettenreaktion)

  • Eine Methode zur Vervielfältigung spezifischer DNA-Sequenzen in vitro.
  • Primer dienen als Startpunkte für die Polymerase.
  • Desoxynukleotide (dNTPs) werden verwendet, um den neuen Strang zu bilden.
  • DNA-Polymerase kopiert die DNA.

Schritte der PCR

  • Denaturierung
  • Hybridisierung
  • Polymerisierung

Nachweis der PCR Reaktion

  • Die resultierenden Fragmente können mittels Elektrophorese nach ihrer Größe und auf dem Gel visualisiert werden.

Elektrophorese

  • Eine Methode zur Trennung von DNA-Fragmenten nach Größe durch ein elektrisches Feld in einem Gel.
  • DNA-Fragmente wandern zu der Anode in dem Gel.

Primer

  • Primer sind kurze, synthetische DNA-Sequenzen, die an die Zielsequenz binden, um die DNA-Polymerase den Beginn der Replikation zu signalisieren.
  • Primer sollten eine geeignete Länge (18-30 Nukleotide), eine gleichmäßige Nukleotidverteilung, Basen G oder C am 3'-Ende, keine Hairpin-Loops und Primer-Dimer-Bildung vermeiden, und eine passende Schmelztemperatur aufweisen.
  • Forward- und Reverse-Primer werden verwendet, um einen spezifischen Abschnitt zu vervielfältigen.

Plasmide zum Klonieren

  • Plasmide sind ringförmige DNA-Moleküle, die sich unabhängig vom Chromosom replizieren.
  • Plasmide enthalten oft Selektionsmarker für das Klonieren.
  • Plasmide enthalten häufig eine Mehrfachklonierungstelle (MCS) mit verschiedenen Restriktionsschnittstellen für die Einfügung anderer DNA-Fragmente.

Bildung eines rekombinanten Vektors

  • DNA-Fragmente werden durch Restriktionsenzyme geschnitten,
  • Die entstehenden DNA-Fragmente werden an das Plasmid angehängt.
  • Die offenen Enden der DNA werden durch die Ligase verschlossen.

Genetischer Austausch bei Prokaryoten

  • Transformation: Aufnahme von freier DNA
  • Konjugation: Übertragung von DNA zwischen zwei Zellen
  • Transduktion: Übertragung von Genen durch einen Virus.

Transformation

  • Aufnahme fremder DNA durch eine Zelle.
  • Vorgehensweise zur chemischen Transformation.
  • Identifizierung erfolgreicher Transformationen mittels Selektion mittels spezifischer Merkmale.

Blau-Weiß Selektion

  • Ein Verfahren in der Molekularbiologie zur Selektion von Klonen, die ein bestimmtes Gen exprimieren.
  • Das verwendete Gen, LacZ, spaltet ein Substrat, was ein Farbumschlag im Reaktionsmedium zeigt.
  • Bei erfolgreicher Transformation ist der Klon farblos, da ein bestimmter Abschnitt im Gen fehlen.

Transduktion

  • Übertragung von Genen durch einen Bakteriophagen (Virus).

Konjugation

  • Übertragung von DNA zwischen zwei Bakterienzellen durch direkten Kontakt.
  • Beteiligung von Plasmiden wie dem F-Plasmid, Resistenzplasmiden und Klonierungsplasmiden.

Kriterien der Wahl von Primern für die PCR.

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