Podcast
Questions and Answers
Welcher Faktor ist entscheidend für die gerichtete Übertragung von DNA bei der Konjugation?
Welcher Faktor ist entscheidend für die gerichtete Übertragung von DNA bei der Konjugation?
- Die DNA-Polymerase
- Das Cytoplasma der Bakterien
- Die Ribosomen
- Der Fertilitätsfaktor (correct)
Was beschreibt einen Hfr-Stamm während der Konjugation?
Was beschreibt einen Hfr-Stamm während der Konjugation?
- Ein Bakterium, dessen Fertilitätsfaktor in sein Genom integriert ist (correct)
- Ein Bakterium mit einem Fertilitätsplasmid ohne zusätzliche Gene
- Ein Bakterium ohne Fertilitätsfaktor
- Ein Bakterium, das keine DNA übertragen kann
Wie erfolgt die DNA-Übertragung zwischen Bakterienzellen während der Konjugation?
Wie erfolgt die DNA-Übertragung zwischen Bakterienzellen während der Konjugation?
- Über Plasmabrücken (correct)
- Durch endozytische Prozesse
- Durch Osmose
- Über aktive Transportmechanismen
Welche Eigenschaft haben F+ Bakterien im Vergleich zu F- Bakterien?
Welche Eigenschaft haben F+ Bakterien im Vergleich zu F- Bakterien?
Was passiert zufällig während der Phagenvermehrung in einer Bakterienzelle?
Was passiert zufällig während der Phagenvermehrung in einer Bakterienzelle?
Welche Funktion haben Restriktionsenzyme innerhalb der Gentechnologie?
Welche Funktion haben Restriktionsenzyme innerhalb der Gentechnologie?
Was ist die Rolle von Ligasen in der Gentechnologie?
Was ist die Rolle von Ligasen in der Gentechnologie?
Warum sind Mikroorganismen ideale Klonierungswirte?
Warum sind Mikroorganismen ideale Klonierungswirte?
Was beschreibt die Funktion von Vektoren oder Plasmid-DNA in der Gentechnologie?
Was beschreibt die Funktion von Vektoren oder Plasmid-DNA in der Gentechnologie?
Welche Aussage zu den Typen von Restriktionsenzymen ist korrekt?
Welche Aussage zu den Typen von Restriktionsenzymen ist korrekt?
In welchem Prozess sind Klonierungen hauptsächlich beteiligt?
In welchem Prozess sind Klonierungen hauptsächlich beteiligt?
Welche Rolle spielen DNA-Transfermethoden in der Gentechnologie?
Welche Rolle spielen DNA-Transfermethoden in der Gentechnologie?
Welches Merkmal ist nicht typisch für Restriktionsenzyme Typ II?
Welches Merkmal ist nicht typisch für Restriktionsenzyme Typ II?
Was geschieht mit der DNA der toten S-Zellen während der Transformation?
Was geschieht mit der DNA der toten S-Zellen während der Transformation?
Was ist eine Voraussetzung, um genetischen Austausch nachzuweisen?
Was ist eine Voraussetzung, um genetischen Austausch nachzuweisen?
Welches ist der erste Schritt im Prozess der chemischen Transformation kompetenter Bakterien?
Welches ist der erste Schritt im Prozess der chemischen Transformation kompetenter Bakterien?
Welche Beschreibung trifft auf eine kompetente Zelle zu?
Welche Beschreibung trifft auf eine kompetente Zelle zu?
Wie lange sollte die Inkubation auf Eis während der chemischen Transformation dauern?
Wie lange sollte die Inkubation auf Eis während der chemischen Transformation dauern?
Was ist der Effekt eines Hitzeschocks auf die kompetenten E.coli-Zellen?
Was ist der Effekt eines Hitzeschocks auf die kompetenten E.coli-Zellen?
Was wird benötigt, nachdem die dabielle Zellen einem Hitzeschock ausgesetzt wurden?
Was wird benötigt, nachdem die dabielle Zellen einem Hitzeschock ausgesetzt wurden?
Was passiert mit der DNA, wenn die Zelle lysiert wird?
Was passiert mit der DNA, wenn die Zelle lysiert wird?
Was ist die Hauptfunktion von Klonierungsplasmiden?
Was ist die Hauptfunktion von Klonierungsplasmiden?
Welche Elemente sind typischerweise in einem Klonierungsvektor enthalten?
Welche Elemente sind typischerweise in einem Klonierungsvektor enthalten?
Was beschreibt den Prozess der Transformation in Bakterien?
Was beschreibt den Prozess der Transformation in Bakterien?
In Griffiths Experimenten, was geschah, als lebende R-Zellen mit toten S-Zellen kombiniert wurden?
In Griffiths Experimenten, was geschah, als lebende R-Zellen mit toten S-Zellen kombiniert wurden?
Was ist eines der Hauptmerkmale eines Expressionsplasmids?
Was ist eines der Hauptmerkmale eines Expressionsplasmids?
Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung von einer Bakterienzelle zu einer anderen über Zellkontakte?
Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung von einer Bakterienzelle zu einer anderen über Zellkontakte?
Welches dieser Elemente hat nicht die Funktion eines Selektionmarkers?
Welches dieser Elemente hat nicht die Funktion eines Selektionmarkers?
Was haben Resistenz-(R-)Plasmide gemeinsam?
Was haben Resistenz-(R-)Plasmide gemeinsam?
Was ist eine charakteristische Eigenschaft von Plasmiden im Vergleich zu Chromosomen?
Was ist eine charakteristische Eigenschaft von Plasmiden im Vergleich zu Chromosomen?
Welcher der folgenden Schritte ist kein Teil der Klonierung eines Gens?
Welcher der folgenden Schritte ist kein Teil der Klonierung eines Gens?
Was passiert bei der Verwendung von Taq-Polymerase während der PCR, wenn keine Restriktionsschnittstellen hinzugefügt werden?
Was passiert bei der Verwendung von Taq-Polymerase während der PCR, wenn keine Restriktionsschnittstellen hinzugefügt werden?
Welches der folgenden Elemente enthält kein Fruchtbarkeitsplasmid?
Welches der folgenden Elemente enthält kein Fruchtbarkeitsplasmid?
Welche undurchsichtige DNA-Sequenz ist wahrscheinlich am besten geeignet, um eine Restriktionsschnittstelle zu erstellen?
Welche undurchsichtige DNA-Sequenz ist wahrscheinlich am besten geeignet, um eine Restriktionsschnittstelle zu erstellen?
Wie nennt man die Technik des Einfügens von DNA-Fragmenten in Plasmide?
Wie nennt man die Technik des Einfügens von DNA-Fragmenten in Plasmide?
Welches Enzym wird oft verwendet, um PCR-Produkte zu amplifieren?
Welches Enzym wird oft verwendet, um PCR-Produkte zu amplifieren?
Welche Aussage beschreibt am besten Plasmide?
Welche Aussage beschreibt am besten Plasmide?
Welche Funktion erfüllt ein Primer in der PCR?
Welche Funktion erfüllt ein Primer in der PCR?
Bei welchem Schritt in der Klonierung wird das rekombinierte Plasmid erzeugt?
Bei welchem Schritt in der Klonierung wird das rekombinierte Plasmid erzeugt?
Welche Funktion haben Primer in der PCR?
Welche Funktion haben Primer in der PCR?
Was ist ein Hauptkriterium für die Auswahl von Primern?
Was ist ein Hauptkriterium für die Auswahl von Primern?
Welche Temperatur wird beim Denaturierungsprozess der PCR verwendet?
Welche Temperatur wird beim Denaturierungsprozess der PCR verwendet?
Wie viele Nukleotide sollten Primer idealerweise lang sein?
Wie viele Nukleotide sollten Primer idealerweise lang sein?
Welches der folgenden Elemente ist kein Bestandteil eines typischen PCR-Reaktionsansatzes?
Welches der folgenden Elemente ist kein Bestandteil eines typischen PCR-Reaktionsansatzes?
Was geschieht in der Annealing-Phase der PCR?
Was geschieht in der Annealing-Phase der PCR?
Was bewirkt eine hohe G-C-Basenpaarung in einem Primer?
Was bewirkt eine hohe G-C-Basenpaarung in einem Primer?
Was ist der Zweck der Ligation in einem Klonierungsprozess?
Was ist der Zweck der Ligation in einem Klonierungsprozess?
Welche Eigenschaften sind wichtig für die Primer-Dimer-Bildung zu vermeiden?
Welche Eigenschaften sind wichtig für die Primer-Dimer-Bildung zu vermeiden?
Welches Element ist während der Elongierungsphase in der PCR entscheidend?
Welches Element ist während der Elongierungsphase in der PCR entscheidend?
Was geschieht während der Denaturierung in der PCR?
Was geschieht während der Denaturierung in der PCR?
Wie lange sollte die annealing Temperatur im Verhältnis zur Schmelztemperatur liegen?
Wie lange sollte die annealing Temperatur im Verhältnis zur Schmelztemperatur liegen?
Welche Funktion hat die Elektrophorese in der PCR?
Welche Funktion hat die Elektrophorese in der PCR?
Wie schützt die DNA der Bakterien ihre eigene genetische Information gegen Bakteriophagen?
Wie schützt die DNA der Bakterien ihre eigene genetische Information gegen Bakteriophagen?
Welche Funktion haben DNA-Methyltransferasen in Bakterien?
Welche Funktion haben DNA-Methyltransferasen in Bakterien?
Was beschreibt am besten die Struktur von Restriktionsenzymen?
Was beschreibt am besten die Struktur von Restriktionsenzymen?
Was sind Isoschizomere in Bezug auf Restriktionsenzyme?
Was sind Isoschizomere in Bezug auf Restriktionsenzyme?
Welches der folgenden Elemente wird nicht von Restriktionsendonukleasen erkannt?
Welches der folgenden Elemente wird nicht von Restriktionsendonukleasen erkannt?
Welche der folgenden Aussagen über Restriktionsenzyme ist korrekt?
Welche der folgenden Aussagen über Restriktionsenzyme ist korrekt?
Wie werden klebrige Enden bei der Restriktion erzeugt?
Wie werden klebrige Enden bei der Restriktion erzeugt?
Was passiert, wenn zwei Restriktionsenzyme unterschiedliche spezifische Erkennungssequenzen erkennen?
Was passiert, wenn zwei Restriktionsenzyme unterschiedliche spezifische Erkennungssequenzen erkennen?
Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Erkennungssequenzen von Restriktionsenzymen vom Typ II?
Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Erkennungssequenzen von Restriktionsenzymen vom Typ II?
Welches der folgenden Restriktionsenzyme ist aus Bacillus amyloliquefaciens isoliert?
Welches der folgenden Restriktionsenzyme ist aus Bacillus amyloliquefaciens isoliert?
Was beschreibt die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?
Was beschreibt die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?
Welche Eigenschaft wird bei der Nomenklatur von Restriktionsenzymen verwendet?
Welche Eigenschaft wird bei der Nomenklatur von Restriktionsenzymen verwendet?
Warum sind palindromische Erkennungssequenzen für Restriktionsenzyme wichtig?
Warum sind palindromische Erkennungssequenzen für Restriktionsenzyme wichtig?
Welches Merkmal ist charakteristisch für Plasmide?
Welches Merkmal ist charakteristisch für Plasmide?
Welche Enzyme werden verwendet, um PCR-Fragmente mit zusätzlichen Restriktionsschnittstellen zu versehen?
Welche Enzyme werden verwendet, um PCR-Fragmente mit zusätzlichen Restriktionsschnittstellen zu versehen?
Was geschieht während der Ligationsphase im Klonierungsprozess?
Was geschieht während der Ligationsphase im Klonierungsprozess?
Welche Eigenschaft hat Taq Polymerase in Bezug auf PCR?
Welche Eigenschaft hat Taq Polymerase in Bezug auf PCR?
Welche Art von Plasmid enthält ausschließlich Fertilitätsgene?
Welche Art von Plasmid enthält ausschließlich Fertilitätsgene?
Was ist die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?
Was ist die Hauptfunktion von Restriktionsenzymen in der Gentechnologie?
Welche Rolle spielt ein Primer während der PCR?
Welche Rolle spielt ein Primer während der PCR?
Was ist das Ziel der TA-Zwischenklonierung?
Was ist das Ziel der TA-Zwischenklonierung?
Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Verwendung von Plasmide in der Gentechnologie?
Welche der folgenden Aussagen beschreibt am besten die Verwendung von Plasmide in der Gentechnologie?
Welche Eigenschaft wird in der PCR-Phase des Annealing genutzt?
Welche Eigenschaft wird in der PCR-Phase des Annealing genutzt?
Welche Aussage beschreibt am besten die Funktion eines Selektionmarkers in Klonierungsplasmiden?
Welche Aussage beschreibt am besten die Funktion eines Selektionmarkers in Klonierungsplasmiden?
Welche Eigenschaft ist typisch für Klonierungsplasmide?
Welche Eigenschaft ist typisch für Klonierungsplasmide?
Was ist der Hauptunterschied zwischen einem Klonierungsplasmid und einem Expressionsplasmid?
Was ist der Hauptunterschied zwischen einem Klonierungsplasmid und einem Expressionsplasmid?
Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung mittels eines Virus?
Welcher Mechanismus beschreibt die Genübertragung mittels eines Virus?
Was passiert mit lebenden R-Zellen, wenn sie mit toten S-Zellen kombiniert werden?
Was passiert mit lebenden R-Zellen, wenn sie mit toten S-Zellen kombiniert werden?
Welche Methode zur genetischen Übertragung involviert Zell-Zell-Kontakte?
Welche Methode zur genetischen Übertragung involviert Zell-Zell-Kontakte?
Welche Funktion hat der Polylinker oder die Multiple Cloning Site (MCS) in einem Klonierungsvektor?
Welche Funktion hat der Polylinker oder die Multiple Cloning Site (MCS) in einem Klonierungsvektor?
Welche der folgenden Aussagen trifft auf die Bedeutung der Transformation zu?
Welche der folgenden Aussagen trifft auf die Bedeutung der Transformation zu?
Was beschreibt am besten die rekombinante DNA-Technologie?
Was beschreibt am besten die rekombinante DNA-Technologie?
Welche der folgenden Methoden gehört nicht zur Gentechnik?
Welche der folgenden Methoden gehört nicht zur Gentechnik?
Was ist eine der Hauptanwendungen von CRISPR/Cas9?
Was ist eine der Hauptanwendungen von CRISPR/Cas9?
Warum darf seit 2018 die Gentechnik nicht in die Keimbahn eingreifen?
Warum darf seit 2018 die Gentechnik nicht in die Keimbahn eingreifen?
Welche der folgenden Optionen beschreibt die Funktion von CRISPR/Cas in der Natur?
Welche der folgenden Optionen beschreibt die Funktion von CRISPR/Cas in der Natur?
Was bezeichnet man als somatische Gentherapie?
Was bezeichnet man als somatische Gentherapie?
Welches dieser Verfahren wird als nicht gentechnisch angesehen?
Welches dieser Verfahren wird als nicht gentechnisch angesehen?
Was ist eine der Hauptschwierigkeiten bei der Verwendung von CRISPR/Cas9-Technologie?
Was ist eine der Hauptschwierigkeiten bei der Verwendung von CRISPR/Cas9-Technologie?
Was ist die Funktion des LacZ-Gens im Lac-Operon?
Was ist die Funktion des LacZ-Gens im Lac-Operon?
Welche Rolle spielt IPTG im Lac-Operon?
Welche Rolle spielt IPTG im Lac-Operon?
Was zeichnet eine blaue Kolonie bei der Blau-Weiß-Selektion aus?
Was zeichnet eine blaue Kolonie bei der Blau-Weiß-Selektion aus?
Was ist ein charakteristisches Merkmal des Operon-Modells?
Was ist ein charakteristisches Merkmal des Operon-Modells?
Welche Aussage trifft am besten auf die Funktion des β-Galactosidase zu?
Welche Aussage trifft am besten auf die Funktion des β-Galactosidase zu?
Wie wird ein Insert innerhalb des Plasmids nachgewiesen?
Wie wird ein Insert innerhalb des Plasmids nachgewiesen?
Was beschreibt den Prozess der allgemeinen Transduktion?
Was beschreibt den Prozess der allgemeinen Transduktion?
Welche Funktion hat der Repressor im Lac-Operon?
Welche Funktion hat der Repressor im Lac-Operon?
Was genau wird bei der Blau-Weiß-Selektion beobachtet?
Was genau wird bei der Blau-Weiß-Selektion beobachtet?
Flashcards
Restriktionsenzyme
Restriktionsenzyme
Enzyme, die DNA an bestimmten Stellen schneiden, wie genetische Scheren.
Vektor-DNA
Vektor-DNA
DNA-Moleküle, die als Transportmittel für fremde DNA dienen (Genfähren).
Plasmid
Plasmid
Kleine, ringförmige DNA-Moleküle in Bakterien, häufig als Vektor in der Gentechnik verwendet.
Ligasen
Ligasen
Signup and view all the flashcards
Embryoteilung
Embryoteilung
Signup and view all the flashcards
Embryotransfer
Embryotransfer
Signup and view all the flashcards
Klonieren
Klonieren
Signup and view all the flashcards
Mikroorganismen
Mikroorganismen
Signup and view all the flashcards
Spender-DNA
Spender-DNA
Signup and view all the flashcards
PCR: Polymerase-Kettenreaktion
PCR: Polymerase-Kettenreaktion
Signup and view all the flashcards
Primer (PCR)
Primer (PCR)
Signup and view all the flashcards
Schmelztemperatur (Primer)
Schmelztemperatur (Primer)
Signup and view all the flashcards
Annealing (PCR)
Annealing (PCR)
Signup and view all the flashcards
Elongierung (PCR)
Elongierung (PCR)
Signup and view all the flashcards
Denaturierung (PCR)
Denaturierung (PCR)
Signup and view all the flashcards
PCR-Zyklus
PCR-Zyklus
Signup and view all the flashcards
Elektrophorese
Elektrophorese
Signup and view all the flashcards
EcoR1
EcoR1
Signup and view all the flashcards
BamH1
BamH1
Signup and view all the flashcards
Plasmid
Plasmid
Signup and view all the flashcards
Ligation
Ligation
Signup and view all the flashcards
PCR-Fragment
PCR-Fragment
Signup and view all the flashcards
Restriktionsfragment
Restriktionsfragment
Signup and view all the flashcards
TA-Zwischenklonierung
TA-Zwischenklonierung
Signup and view all the flashcards
Taq-Polymerase
Taq-Polymerase
Signup and view all the flashcards
Resistenzgene (Plasmide)
Resistenzgene (Plasmide)
Signup and view all the flashcards
Spender-DNA
Spender-DNA
Signup and view all the flashcards
Klonieren eines Gens
Klonieren eines Gens
Signup and view all the flashcards
Zweck von Restriktionsschnittstellen?
Zweck von Restriktionsschnittstellen?
Signup and view all the flashcards
Plasmid - Funktion
Plasmid - Funktion
Signup and view all the flashcards
Klonierungsplasmid
Klonierungsplasmid
Signup and view all the flashcards
Expressionsplasmid
Expressionsplasmid
Signup and view all the flashcards
Resistenz-Plasmid
Resistenz-Plasmid
Signup and view all the flashcards
Replikationsursprung (ORI)
Replikationsursprung (ORI)
Signup and view all the flashcards
Selektionsmarker
Selektionsmarker
Signup and view all the flashcards
Multiple Cloning Site (MCS)
Multiple Cloning Site (MCS)
Signup and view all the flashcards
Transformation (Genetik)
Transformation (Genetik)
Signup and view all the flashcards
Konjugation (Genetik)
Konjugation (Genetik)
Signup and view all the flashcards
Transduktion (Genetik)
Transduktion (Genetik)
Signup and view all the flashcards
Transformation (in Bakterien)
Transformation (in Bakterien)
Signup and view all the flashcards
S-Zelle
S-Zelle
Signup and view all the flashcards
R-Zelle
R-Zelle
Signup and view all the flashcards
Kompetenz (Bakterien)
Kompetenz (Bakterien)
Signup and view all the flashcards
Chemisch Kompetenz
Chemisch Kompetenz
Signup and view all the flashcards
Hitzeschock
Hitzeschock
Signup and view all the flashcards
Merkmalsunterschiede
Merkmalsunterschiede
Signup and view all the flashcards
Phagenvermehrung
Phagenvermehrung
Signup and view all the flashcards
Konjugation
Konjugation
Signup and view all the flashcards
Fertilitätsfaktor
Fertilitätsfaktor
Signup and view all the flashcards
F+-Bakterium
F+-Bakterium
Signup and view all the flashcards
F'-Bakterium
F'-Bakterium
Signup and view all the flashcards
Hfr-Stamm
Hfr-Stamm
Signup and view all the flashcards
Plasmabrücke
Plasmabrücke
Signup and view all the flashcards
Was ist Gentechnik?
Was ist Gentechnik?
Signup and view all the flashcards
Was sind die Hauptanwendungsgebiete der Gentechnik?
Was sind die Hauptanwendungsgebiete der Gentechnik?
Signup and view all the flashcards
Was ist CRISPR/Cas9?
Was ist CRISPR/Cas9?
Signup and view all the flashcards
Was sind CRISPR/Cas-Systeme?
Was sind CRISPR/Cas-Systeme?
Signup and view all the flashcards
Was ist das Besondere an CRISPR/Cas9 im Kontext der Gentechnik?
Was ist das Besondere an CRISPR/Cas9 im Kontext der Gentechnik?
Signup and view all the flashcards
Warum unterliegt CRISPR/Cas9 seit 2018 dem Gentechnikgesetz?
Warum unterliegt CRISPR/Cas9 seit 2018 dem Gentechnikgesetz?
Signup and view all the flashcards
Was zählt nicht zur Gentechnik?
Was zählt nicht zur Gentechnik?
Signup and view all the flashcards
Was ist der Unterschied zwischen klassischer Züchtung und Gentechnik?
Was ist der Unterschied zwischen klassischer Züchtung und Gentechnik?
Signup and view all the flashcards
Restriktionsenzyme vom Typ II
Restriktionsenzyme vom Typ II
Signup and view all the flashcards
Nomenklatur von Restriktionsenzymen
Nomenklatur von Restriktionsenzymen
Signup and view all the flashcards
Beispiele für Restriktionsenzyme
Beispiele für Restriktionsenzyme
Signup and view all the flashcards
Funktion von Restriktionsenzymen
Funktion von Restriktionsenzymen
Signup and view all the flashcards
Herkunft von Restriktionsenzymen
Herkunft von Restriktionsenzymen
Signup and view all the flashcards
Bakteriophagenabwehr
Bakteriophagenabwehr
Signup and view all the flashcards
Restriktionsendonukleasen
Restriktionsendonukleasen
Signup and view all the flashcards
DNA-Methylierung
DNA-Methylierung
Signup and view all the flashcards
Isoschizomere
Isoschizomere
Signup and view all the flashcards
Glatte Enden
Glatte Enden
Signup and view all the flashcards
Klebrige Enden
Klebrige Enden
Signup and view all the flashcards
Restriktionsenzym-Dimer
Restriktionsenzym-Dimer
Signup and view all the flashcards
Erkennungssequenz
Erkennungssequenz
Signup and view all the flashcards
Resistenz-(R-)Plasmide
Resistenz-(R-)Plasmide
Signup and view all the flashcards
Polylinker
Polylinker
Signup and view all the flashcards
Transformation
Transformation
Signup and view all the flashcards
Ampicillin-Resistenz
Ampicillin-Resistenz
Signup and view all the flashcards
Lac-Operon
Lac-Operon
Signup and view all the flashcards
Repressor (Lac-Operon)
Repressor (Lac-Operon)
Signup and view all the flashcards
Induktor (Lac-Operon)
Induktor (Lac-Operon)
Signup and view all the flashcards
β-Galactosidase
β-Galactosidase
Signup and view all the flashcards
Blau-Weiß-Selektion
Blau-Weiß-Selektion
Signup and view all the flashcards
X-Gal
X-Gal
Signup and view all the flashcards
MCS (Multiple Cloning Site)
MCS (Multiple Cloning Site)
Signup and view all the flashcards
Allgemeine Transduktion
Allgemeine Transduktion
Signup and view all the flashcards
Virulenter Bakteriophage
Virulenter Bakteriophage
Signup and view all the flashcards
Study Notes
Gentechnik - Definition
- Gentechnik ist die Anwendung moderner molekularbiologischer Methoden zur Änderung der genetischen Eigenschaften von Organismen.
- "Rekombinante DNA-Technologie" ermöglicht gezielte Re- bzw. Neukombination von Erbinformation.
Gentechnik - Anwendungsbereiche
- Herstellung von Proteinen für medizinische und technische Anwendungen
- Herstellung von transgenen Pflanzen und Tieren
- Gendiagnostik
- Somatische Gentherapie
- CRISPR/Cas9 ist seit 2018 ebenfalls ein Bereich der Gentechnik.
CRISPR/Cas9
- CRISPR/Cas9 ist ein weit verbreitetes Immunsystem bei Bakterien und Archaeen, das diese vor Phagen und Plasmiden schützt.
- crRNAs (CRISPR-assoziierte kurze RNA) werden verwendet, um fremde Nukleinsäuren sequenzspezifisch zu deaktivieren.
- tracrRNA (trans-codierte kleine RNA) lenkt die Reifung von crRNAs durch die Aktivität der konservierten RNase III und dem CRISPR-assoziierten Cas-Protein.
- Diese Bestandteile sind essentiell für den Schutz vor fremden DNA.
- Zwei CRISPR/Cas-Lokalisierungen (CRISPR1, CRISPR2) in Streptococcus pyogenes wurden identifiziert.
CRISPR/Cas: Erworbene Immunität von Bakterien
- Spacer werden aus fremdem genetischem Material gewonnen und in den CRISPR-Array eingefügt.
- Transkription und Verarbeitung von pre-crRNA zu crRNA.
- Die Fremd-DNA wird gespalten und inaktiviert.
Werkzeuge der Gentechnologie
- Spender-DNA (z.B. ein Gen oder eine bestimmte Nukleotidsequenz)
- Vektor- oder Plasmid-DNA fungiert als Genfähren.
- Restriktionsenzyme schneiden DNA wie „genetische Scheren“.
- Ligasen kleben DNA wie „genetische Kleber“.
- DNA-Transfermethoden transferieren die DNA.
- Wirtsorganismen beherbergen den Vektor.
Klonieren
- Ein Verfahren zur Herstellung genetisch identischer Kopien von DNA-Fragmenten.
- DNA-Fragmente werden in Plasmide eingefügt, welche in Wirtszellen repliziert werden.
- Selektion von Zellen, die das rekombinierte Plasmid enthalten.
Mikroorganismen in der Gentechnik
- Ideale Mikroorganismen in der Gentechnik sind klein, vermehren sich schnell, ihr Genom ist manipulierbar, und sie sind leicht zu kultivieren.
Häufig verwendete Klonierungswirte
- Escherichia coli: gut untersuchte Prokaryoten
- Bacillus subtilis: einfach zu transformieren
- Saccharomyces cerevisiae: gut untersuchte eukaryotische Organismen
Restriktionsenzyme
- Typ I schneidet die DNA zufällig weit von der Erkennungssequenz entfernt (ATP erforderlich)
- Typ II schneidet die DNA innerhalb oder direkt an der Erkennungssequenz (kein ATP erforderlich)
- Typ III schneidet die DNA etwa 20-25 Basenpaare von der Erkennungssequenz entfernt (ATP erforderlich)
- Typ II Restriktionsendonukleasen erkennen spezifische, oft palindromische, Sequenzen auf der DNA.
- In der Praxis fungieren Restriktionsenzyme als genetische Scheren.
Nomenklatur der Restriktionsenzyme
- Die Nomenklatur von Restriktionsenzymen umfasst die Gattungs- und Artnamen des Bakteriums, dem das Enzym entstammt, den Stamm und eine Nummer, die die Reihenfolge ihrer Entdeckung angibt (z.B., EcoRI).
Herkunft der Restriktionsenzyme
- Bakterien verwenden Restriktionsenzyme, um sich gegen virale DNA zu verteidigen (Bakteriophagen).
- Das Enzym spaltet die fremde DNA.
Bakterielle Methylierung
- Bakterien schützen ihre eigene DNA durch Methylierung (Anfügen einer Methylgruppe).
- Methylierung erfolgt im Bereich, wo es zur Spaltung by Restriktionsenzymes kommt.
Restriktionsenzyme sind Dimere
- Restriktionsenzyme bestehen oft aus zwei Untereinheiten (Dimeren), die an die DNA angepasst sind.
Restriktion - Sticky Ends
- DNA-Abschnitte mit „klebrigen Enden“ ergeben sich durch Restriktionsenzyme.
- Diese Form der DNA hat komplementäre Einzelstrang-Aussparungen.
Restriktion - Glatte Enden
- DNA-abschnitte mit glatten Enden ergeben sich durch Restriktionsenzyme.
Isoschizomere
- Isoschizomere sind verschiedene Restriktionsenzyme, die dieselbe Erkennungs-Sequenz haben, aber unterschiedliche Spaltmuster erzeugen.
Klonieren eines Gens
- Verfahren, ein Gen zu klonieren, indem Restriktionsenzyme verwendet werden, um ein Gen von einem Vektor zu erhalten.
PCR (Polymerase-Kettenreaktion)
- Eine Methode zur Vervielfältigung spezifischer DNA-Sequenzen in vitro.
- Primer dienen als Startpunkte für die Polymerase.
- Desoxynukleotide (dNTPs) werden verwendet, um den neuen Strang zu bilden.
- DNA-Polymerase kopiert die DNA.
Schritte der PCR
- Denaturierung
- Hybridisierung
- Polymerisierung
Nachweis der PCR Reaktion
- Die resultierenden Fragmente können mittels Elektrophorese nach ihrer Größe und auf dem Gel visualisiert werden.
Elektrophorese
- Eine Methode zur Trennung von DNA-Fragmenten nach Größe durch ein elektrisches Feld in einem Gel.
- DNA-Fragmente wandern zu der Anode in dem Gel.
Primer
- Primer sind kurze, synthetische DNA-Sequenzen, die an die Zielsequenz binden, um die DNA-Polymerase den Beginn der Replikation zu signalisieren.
- Primer sollten eine geeignete Länge (18-30 Nukleotide), eine gleichmäßige Nukleotidverteilung, Basen G oder C am 3'-Ende, keine Hairpin-Loops und Primer-Dimer-Bildung vermeiden, und eine passende Schmelztemperatur aufweisen.
- Forward- und Reverse-Primer werden verwendet, um einen spezifischen Abschnitt zu vervielfältigen.
Plasmide zum Klonieren
- Plasmide sind ringförmige DNA-Moleküle, die sich unabhängig vom Chromosom replizieren.
- Plasmide enthalten oft Selektionsmarker für das Klonieren.
- Plasmide enthalten häufig eine Mehrfachklonierungstelle (MCS) mit verschiedenen Restriktionsschnittstellen für die Einfügung anderer DNA-Fragmente.
Bildung eines rekombinanten Vektors
- DNA-Fragmente werden durch Restriktionsenzyme geschnitten,
- Die entstehenden DNA-Fragmente werden an das Plasmid angehängt.
- Die offenen Enden der DNA werden durch die Ligase verschlossen.
Genetischer Austausch bei Prokaryoten
- Transformation: Aufnahme von freier DNA
- Konjugation: Übertragung von DNA zwischen zwei Zellen
- Transduktion: Übertragung von Genen durch einen Virus.
Transformation
- Aufnahme fremder DNA durch eine Zelle.
- Vorgehensweise zur chemischen Transformation.
- Identifizierung erfolgreicher Transformationen mittels Selektion mittels spezifischer Merkmale.
Blau-Weiß Selektion
- Ein Verfahren in der Molekularbiologie zur Selektion von Klonen, die ein bestimmtes Gen exprimieren.
- Das verwendete Gen, LacZ, spaltet ein Substrat, was ein Farbumschlag im Reaktionsmedium zeigt.
- Bei erfolgreicher Transformation ist der Klon farblos, da ein bestimmter Abschnitt im Gen fehlen.
Transduktion
- Übertragung von Genen durch einen Bakteriophagen (Virus).
Konjugation
- Übertragung von DNA zwischen zwei Bakterienzellen durch direkten Kontakt.
- Beteiligung von Plasmiden wie dem F-Plasmid, Resistenzplasmiden und Klonierungsplasmiden.
Kriterien der Wahl von Primern für die PCR.
Studying That Suits You
Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.