Absorción de Luz UV por Ácidos Nucleicos

Absorción de Luz UV por Ácidos Nucleicos

• Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta a una longitud de onda específica (260 nm).
• La cantidad de luz absorbida es proporcional a la concentración del ácido nucleico.
• Mayor absorción indica mayor concentración.

Coeficientes de Extinción

• El coeficiente de extinción del ADN de doble cadena a 260 nm es de 0.020 (g/mL)-1cm-1.
• El coeficiente de extinción del ADN de simple cadena y del ARN a 260 nm es de 0.027 (g/mL)-1cm-1 (ARN) y varía (Oligonucleótidos) en función de la longitud y composición.
• El ADN de doble cadena absorbe menos luz que el ADN de simple cadena debido al emparejamiento de bases.

Concentración a partir de Absorbancia (DO)

• Una densidad óptica (DO) de 1 a 260 nm corresponde aproximadamente a:
  • 50 µg/mL de ADN de doble cadena.
  • 40 µg/mL de ADN o ARN de cadena simple.
  • 20 µg/mL de oligonucleótidos.

Pureza de Ácidos Nucleicos

• La pureza de los ácidos nucleicos se evalúa analizando la absorción a diferentes longitudes de onda.
• Las proteínas absorben fuertemente a 280 nm. Los polisacáridos absorben a 230 nm.
• La relación entre la absorbancia a 230 nm, 260 nm y 280 nm (DO 230:260:280) indica la pureza:
  • Una relación de 1:2:1 para ARN indica una muestra limpia.
  • Una relación de 1:1.8:1 para ADN indica una muestra limpia.
• Desviaciones de estas relaciones sugieren contaminación.

Consideraciones Adicionales en la Extracción

• Los reactivos utilizados en la extracción pueden afectar la pureza y la concentración.
• Es crucial analizar todo el espectro ultravioleta de 200-320 nm para detectar la presencia de otros productos químicos que podrían influir en los valores de absorbancia y la concentración.
• La presencia de reactivos puede producir datos engañosos.

Este cuestionario examina la absorción de luz ultravioleta por ácidos nucleicos, incluyendo sus coeficientes de extinción y la relación entre absorbancia y concentración. Se discutirán aspectos clave como la pureza y las diferencias en absorción entre ADN de doble y simple cadena.