Règles à suivre au laboratoire de microbiologie - TP n°01 (PDF)

TP n°01 Bactériologie générale REGLES A SUIVRE DANS UN LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE Les micro-organismes sont présents dans tous les milieux naturels, qu'ils soient terrestres, aquatiques ou aériens. Les êtres vivants, animaux ou végétaux, portent des multitudes de micro-organismes à la...

TP n°01 Bactériologie générale REGLES A SUIVRE DANS UN LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE Les micro-organismes sont présents dans tous les milieux naturels, qu'ils soient terrestres, aquatiques ou aériens. Les êtres vivants, animaux ou végétaux, portent des multitudes de micro-organismes à la surface de leur revêtement cutané et muqueux et dans leurs cavités naturelles Avant de débuter le TP et A la fin du TP Se laver les mains aussitôt que vous entrez dans le laboratoire: - Aide à prévenir la contamination De votre travail avec des micro- organismes de votre flore naturelle.  Avant de commencer – À la fin Désinfecter la paillasse (votre poste de travail) avant et après les manipulations à l’aide de l’eau de Javel et des linges situées sur le côté. Aide à prévenir la contamination des cultures avec des microorganismes de votre environnement.  Porter une blouse blanche en coton (limiter tous les risques d’inflammabilité ) aide à prévenir de toute éclaboussure d’un liquide bactériologique, aussi de l’eau de javel Ongles coupés et propres. Les cheveux longs doivent obligatoirement être attachés. Enlever les cache-nez et les écharpes quand on travaille dans un laboratoire de microbiologie  Ne pas fumer, ne pas manger dans le laboratoire. Eviter de parler, de tousser , d’éternuer pendant les manipulations. -Éviter les ouvertures des fenêtres pendant les manipulations- - Les instruments de travail contaminés seront déposés dans des récipients spéciaux, jamais sur la paillasse, sauf après stérilisation. - Ne rien jeter à la poubelle ou dans l’évier. Chaque déchet a sa place. On vous l’indiquera  Ouvrir avec précaution les récipients contenant des cultures microbiennes, afin d'éviter toute projection et contamination Les personnes présentant des coupures ou écorchures sérieuses aux mains porteront des gants (le signaler à l’enseignant)  La STERILISATION :est l'opération qui consiste à éliminer les micro-organismes d'un objet, et ce de manière durable. le but de la stérilisation est la destruction ou l inactivation irréversible de tous les micro-organismes qui se trouvent dans ou sur un objet,  1-La stérilisation par la chaleur La chaleur détruit les bactéries et les spores. On distingue les procédés à chaleur « sèche » ou « humide ». Sèche : Bec Bunsen FF Four Pasteur Etuve Etuve(chaleur, sèche) Humide: un autoclave  1-1-Chaleur sèche : a. Flambage : Le passage dans la flamme (bec BUNSEN) de la surface de matériel non inflammable assure une parfaite stérilisation. On stérilise de cette façon les fils de platine et les pipettes Pasteur.  b- Four pasteur : C'est un four-étuve à air chaud et sec. Il est utilisé à 180°C pendant 90 minutes. Cet appareil n'est utilisé que pour la stérilisation de la verrerie préalablement nettoyée et séchée ou de matériels métalliques (instruments de dissection)pouvant tolérer de très hautes températures.  L’autoclave 1-2-La stérilisation à la chaleur humide (à la vapeur) a pour but - d'éliminer tous les germes ou les contaminants en mettant l'objet en contact à une température 120 °C plus une surpression de 1 bar pendant 20 min et cela sur la totalité de la surface à stériliser. L’appareil utilisé est l’autoclave Stérilisation à la chaleur sèche L’autoclave (Stérilisation à la chaleur humide) Stérilisation par les produits chimiques L'alcool éthylique à 60% pour la désinfection des paillasses et des instruments. Mais certains germes étant résistants, la désinfection n'est pas toujours évidente. L'hypochlorite de sodium (eau de Javel) est utilisé dans les bacs ou erlens préparés pour déposer les lames utilisées, ou en pissette pour la désinfection des mains, des paillasses et des sols. l'eau de Javel est toujours largement employée en milieu hospitalier, dans certaines industries et à domicile. Les savons et détergents L’anse de platine Boite de pétri Un bain -marie Des portoirs Microscopes optiques / lames / lamelles Confinement=Isolement Un confinement au sein d’un laboratoire : l’ensemble des mesures techniques et des actions visant à maintenir un agent biologique ou une autre entité dans un espace déterminé. Tout dépend de du degré de pathogénicité de l’agent biologique manipulé au sein du laboratoire On utilisera une hotte, le port des gants des lunettes de protection , des masques respiratoires, des chaussures à bouts fermés strictement réservés au laboratoires, sera indispensable.  Il faut signaler le laboratoire par un picogramme biologique(panneau) est obligatoire, dans le cas ou nous manipulons des agents biologiques dangereux,  Biosécurité Pour minimiser les risques de contamination humaine et de diffusion dans le milieu extérieur par les bactéries pathogènes: IL FAUT DécontaminerTout matériel contaminé et utilisé , par un autoclave Avant de le jeter dans les poubelles qui seront vidées par les éboueurs ou autres (humains ou animaux) Une incinération (réduire en cendres, détruire par le feu) est également à envisager FIN Question Quels les moyens de stérilisation utilisés dans un laboratoire de bactériologie?