Técnicas Histológicas y Microscopia PDF

# Técnicas Histológicas y Microscopia ## Preparación del Tejido 1. **Obtención de la muestra:** - Biopsia: tejido vivo. - Autopsia: tejido muerto. - Necropsia: tejido podrido - necrosado. 2. **Fijación:** - Se utiliza sustancias químicas para preservar la muestra. - Formalina...

# Técnicas Histológicas y Microscopia ## Preparación del Tejido 1. **Obtención de la muestra:** - Biopsia: tejido vivo. - Autopsia: tejido muerto. - Necropsia: tejido podrido - necrosado. 2. **Fijación:** - Se utiliza sustancias químicas para preservar la muestra. - Formalina (solución acuosa de formaldehido al 37%) es el fijador más común. - La formalina no reacciona bien con los lípidos, por lo que no es un buen fijador de las membranas. 3. **Deshidratación:** - Se utiliza una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente para eliminar el agua de la muestra. - Luego, se utilizan solventes como el xileno o tolueno para extraer el alcohol. 4. **Inclusión:** - La muestra se incluye en parafina fundida a 60 grados. - Se obtiene un bloque denominado "taco". - Se utiliza un micrótomo para realizar cortes de 5 a 15 µm (micras). 5. **Coloración:** - La muestra se hidrata con soluciones alcohólicas y se tiñe con: - Hematoxilina (color azul) - Eosina (color rosa) ## Microscopia ### Microscopia Óptica - Microscopio de campo claro: - Se utiliza comúnmente en los estudios del siglo XIX. - Componentes: - Fuente luminosa - Condensador - Platina - Objetivo - Ocular - Se requiere que las muestras sean: - Extremadamente finas para permitir el paso de la luz. - Coloreadas con eosina y hematoxilina para lograr suficiente contraste. - Microscopio de campo oscuro: - La lente objetiva no capta luz directa de la fuente. - Se utiliza un condensador especial que ilumina la muestra con luz oblicua. - Solo se observa la luz refractada por las estructuras de la muestra. - Se pueden detectar partículas más pequeñas que con el microscopio de campo claro. - Microscopio de fluorescencia: - Utiliza la fluorescencia de algunas moléculas al iluminarlas con luz ultravioleta. - Se utiliza para estudiar la fluorescencia secundaria, como en las técnicas de inmunocitoquímica. - Microscopio confocal de barrido: - Combina componentes de un microscopio de campo claro con un sistema de barrido. - Se utiliza para diseccionar ópticamente una muestra. - Fue desarrollado para estudiar la estructura de materiales biológicos. - Utiliza un sistema de iluminación a laser que produce un punto de barrido superficial. - Microscopio de luz ultravioleta: - La imagen depende de la absorción de la luz UV por las moléculas de la muestra. - La muestra no se puede observar directamente porque la luz UV no es visible y puede lesionar el ojo. - Los resultados se registran en una placa fotográfica. - Microscopio de polarización: - Es una modificación del microscopio de campo claro que utiliza filtros de polarización. ### Microscopia Electrónica - Microscopio electrónico de transmisión (MET): - Utiliza la interacción de un haz de electrones con la muestra para producir una imagen. - Microscopio electrónico de barrido (MEB): - El haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que explora su superficie. - Microscopio electrónico de transmisión-barrido: - Combina características del MET y del MEB. - Se utiliza para el microanálisis de rayos X por sonda electrónica. ## La Célula - Son las unidades estructurales y funcionales básicas de todos los organismos multicelulares. - Funciones: - Protección - Ingestión - Digestión - Absorción - Eliminación de desechos - Movimiento - Reproducción - Se dividen en dos compartimientos principales: - Núcleo - Citoplasma ### Núcleo - Compartimiento limitado por membrana que contiene el genoma en las células eucarióticas. - Componentes: - Cromatina: Complejo de DNA y proteínas. - Nucléolo: Sitio de síntesis del rRNA y armado inicial de los ribosomas. - Nucleoplasma: Contenido nuclear que no es cromatina ni nucléolo. - Envoltura Nuclear: Formada por dos membranas que separan el nucleoplasma del citoplasma. ### Citoplasma - Matriz citoplasmática (Citosol): - Gel acuoso concentrado compuesto por diversas moléculas. - Sitio donde ocurren procesos fisiológicos como la síntesis de proteínas y la degradación de nutrientes. - Inclusiones: - Componentes no vivos de la célula que pueden o no estar rodeados por membrana. - Tipos: - Inclusiones lipídicas - Inclusiones cristalinas - Organelas: - Membranosas: - Membrana Plasmática: - Estructura dinámica que participa en diversos proceso bioquímicos y fisiológicos de la célula. - Modelo del mosaico fluido modificado. - Formada principalmente por: - Fosfolípidos - Colesterol - Proteínas - Posee seis categorías amplias de proteínas integrales: - Proteína Bomba: Transporte activo de iones. - Proteína Canal: Difusión pasiva de iones y moléculas. - Proteínas Receptoras: Reconocimiento y fijación de ligandos. - Proteínas Ligadoras: Fijación del citoesqueleto a la matriz extracelular. - Enzimas: Función específica en el bombeo de iones. - Proteínas Estructurales: Visibles mediante criofractura. - El principal mecanismo para el movimiento de moléculas dentro de la célula es la brotación vesicular. - Puede ser de dos formas: - Endocitosis: Incorporación de sustancias a la célula. - Pinocitosis: Incorporación de líquido y pequeñas moléculas. - Endocitosis mediada: Incorporación de moléculas específicas. - Fagocitosis: Incorporación de grandes partículas. - Exocitosis: Salida de sustancias de la célula. - Constitutivo - De secreción regulada - Endosomas: - Estructuras temporales formadas por la endocitosis. - Tipos: - Endosomas tempranos: - Pueden retornar a la membrana plasmática o formar endosomas tardíos. - Endosomas tardíos: - Se convertirán en lisosomas. - Lisosomas: - Moléculas digestivas responsables de la degradación de macromoléculas derivadas de la endocitosis. - Degradan: - Partículas celulares grandes - Partículas extracelulares pequeñas - Partículas intracelulares - Retículo Endoplasmático de Superficie Rugoso (rRE): - Asociado a los ribosomas. - Produce la síntesis proteica y la modificación de proteínas neosintetizadas. - Procesos: - Transcripción - Traducción - Retículo Endoplasmático de Superficie Lisa (rRE): - No asociado a los ribosomas. - Funciones: - Desintoxicación y conjugación de sustancias nocivas. - Metabolismo de lípidos y esteroides. - Metabolismo de glucógeno. - Formación y reciclaje de membranas. - Aparato de Golgi: - Modifica, clasifica y empaqueta proteínas y lípidos para su transporte. - Destinados a: - Membrana plasmática basolateral - Membrana plasmática apical - Endosomas o lisosomas - Citoplasma apical - Vesículas de Transporte: - Intervienen en la endocitosis y la exocitosis. - Su forma y tamaño dependen del material transportado. - No Membranosas - Mitocondrias: - Proveen la mayor parte de la energía de la célula. - Realizan fosforilación oxidativa para generar ATP. - Poseen dos membranas: - Membrana mitocondrial interna - Membrana mitocondrial externa - Detectan el estrés celular e inician la apoptosis si es necesario. - Peroxisomas: - Contienen enzimas oxidativas como la catalasa y peroxidasas. - Participan en la producción y degradación de H2O2. - Degradan ácidos grasos. - Microtúbulos: - Tubos proteicos huecos, rígidos y no ramificados. - Se desarman y rearman rápidamente. - Forman un sistema de conexiones en la célula. - Funciones: - Movimiento vesicular. - Transporte vesicular intracelular. - Fijación de cromosomas al huso mitótico durante la mitosis y meiosis. - Movimiento de cilios y flagelos. - Alargamiento y movimiento de las células. - Mantenimiento de la forma celular. - Microfilamentos (Filamentos de Actina): - Estructuras polarizadas. - Se encuentran en casi todos los tipos de células. - Se polimerizan y organizan por la concentración de actina G y de las proteínas fijadoras de actina (ABP). - Funciones: - Anclaje y movimiento de proteínas de la membrana. - Formación del núcleo estructural de las microvellosidades. - Locomoción celular. - Emisión de prolongaciones celulares. - Filamentos Intermedios: - Funciones de sostén. - Su diámetro es intermedio entre los filamentos de actina y los microtúbulos. - Sus proteínas poseen un dominio bastoniforme central y dominios globulares en los extremos. - Son indispensables para la integridad de las uniones célula-célula y célula-matriz. - Tipos: - Queratinas - Filamentos de vimentina - Neurofilamentos - Láminas - Centriolos: - Cilindros citoplasmáticos cortos y en pares, formados por 9 tripletes de microtúbulos. - Se encuentran en la región del MTOC (centrosoma) donde se forman los microtúbulos. - Sus funciones son: - Formación de cuerpos basales. - Formación del huso mitótico. - Cuerpos Basales: - Cada cilio necesita un cuerpo basal. - Se derivan de un centriolo y sirven como centro organizador para el armado de microtúbulos del cilio. - Ribosomas: - Estructuras compuestas de rRNA y proteínas ribosómicas. - Indispensables para la síntesis de proteínas. ## Tejido Epitelial y Glándulas - Tejido avascular que tapiza superficies externas, reviste cavidades internas y forma glándulas. - Características: - Membrana Basal - Compuesta por: - Lámina lúcida - Lámina basal - Funciones: - Adhesión estructural - Compartimentalización - Filtración - Inducción de polaridad - Armazón textural - Regiones: - Apical: - Puede presentar modificaciones estructurales en su superficie. - Microvellosidades: Prolongaciones citoplasmáticas digitiformes. - Estereocilios: Microvellosidades inmóviles de gran longitud. - Cilios: Estructuras citoplasmáticas móviles. - Lateral: - En íntimo contacto con las células vecinas. - Posee proteínas exclusivas (moléculas de adhesión). - Tipos de uniones laterales: - Unión ocluyentes - Unión adherentes - Unión comunicantes - Basal: - Se caracteriza por: - Membrana basal - Uniones célula-matriz extracelular - Repliegues de la membrana plasmática. ### Clasificación del tejido epitelial - Según la cantidad de capas celulares: - Simple: Un solo estrato celular. - Estratificado: Dos o más estratos celulares. - Según la morfología de las células superficiales: - Planas: Ancho y profundidad mayores que la altura. - Cúbicas: Ancho y profundidad similares a la altura. - Cilíndricas: Altura mayor que el ancho y la profundidad. - Epitelios especiales - Seudoestratificado: Parece estratificado pero no lo es, ya que algunas células no alcanzan la superficie libre. - De transición o Urotélio: Estratificado con características para distenderse. Se encuentra en las vías urinarias. ### Nombre propio - Endotelio: Revestimiento del aparato cardiovascular. - Mesotelio: Tapiza las paredes y el contenido de cavidades cerradas del cuerpo (abdominal, pericardica, pleural). ### Función del tejido epitelial - Barrera o protección: - Epidermis - Epitelio de la vejiga - Secretora: - Epitelios del estómago y de las glándulas gástricas. - Absorción: - Epitelios del intestino - Túbulos proximales del riñón - Transporte: - Epitelio seudoestratificado cilíndrico ciliado con células caliciformes (tráquea). - Sensorial o receptora: - Epitelio olfativo de la lengua - Retina del ojos ### Clasificación de las glándulas según el destino de sus productos - Endocrinas: Secretan sus productos hacia el tejido conjuntivo y de ahí al torrente sanguíneo. - Exocrinas: Secretan sus productos hacia la superficie en forma directa o a través de tubos o conductos epiteliales. - Glándulas unicelulares: Componentes secretor consiste en células individuales. - Glándulas multicelulares: Compuestas por más de una célula y exhiben grados de complejidad. - **Según la disposición de las células secretoras o según la ramificación de los conductos excretores:** - Simple: Conducto excretor no ramificado. - Compuesta: Conducto excretor ramificado. - Tubular: Porción secretora tiene forma de tubo. - Alveolar o Acinosa: Porción secretora es redondeada con una luz pequeña. - Tubuloalveolar: Característica mixta ### Clasificación de las glándulas exocrinas según su mecanismo secreción - Merocrina: El producto se envía a la superficie apical en vesículas. - Apocrina: El producto se libera dentro de una envoltura de membrana plasmática. - Holocrina: El producto se acumula en la célula y se libera con la muerte celular. - Paracrina: El producto no llega al torrente sanguíneo, solo al tejido conjuntivo ocasionando destrucción. ### Clasificación de las glándulas exocrinas según el tipo de secreción - Mucosas: Gran glucosilación de las proteínas constitutivas. - Serosas: Secreciones proteicas no glucosiladas o con escasa glucosilación. - Mixtas: Combinación de características mucosas y serosas. ### Clasificación de las glándulas según su forma - Rectas - Ramificadas - Enrolladas - Compuesta ## Tejido Conjuntivo y Adiposo - Tejido conjuntivo (conectivo) - Tejido conjuntivo embrionario (mesodermo): - Tejido conjuntivo mesenquimático: Células fusiformes pequeñas de aspecto uniforme. - Tejido conjuntivo mucoso: Se encuentra en el cordón umbilical, con matriz extracelular especializada gelatinosa. - Tejido conjuntivo del adulto: Presenta colágeno tipo I. - Tejido conjuntivo laxo: Pocas fibras de colágeno y abundantes células. - Tejido conjuntivo denso: Presenta colágeno tipo I. - No moderado: Fibras desordenadas y en varias direcciones. - Moderado: Fibras y células juntas y alineadas para mayor resistencia. ### Tejido conjuntivo especializado: - Tejido adiposo - Tejido cartilaginoso - Tejido hemopoyético - Tejido linfático - Tejido óseo - Tejido sanguíneo ### Componentes del tejido conjuntivo - Células - Residentes (fijas): - Fibroblastos: Síntesis de los carbohidratos y de las fibras de colágeno, reticular y elástica. - Macrófagos: Células fagocitativas que se unen para formar una célula grande con 100 núcleos para fagocitar material grande. - Mastocitos: Liberan sustancias vasoactivas e inmunorreactivas, provocando reacciones de hipersensibilidad inmediata. - Adipocitos: Almacenan lípidos neutros. - Células mesenquimáticas indiferenciadas: Dan origen a células diferenciadas de la reparación de tejidos. - Errantes (libres): - Linfocitos: Participan en las respuestas inmunes. - Células T: Efectoras en la inmunidad mediada por células. - Células B: Efectoras en la inmunidad mediada por anticuerpos. - Células NK: Destructoras naturales que destruyen células infectadas por virus. - Plasmocitos: Productores de anticuerpos. - Neutrófilos y Monocitos: Migran hacia tejido lesionado. - Eosinófilos: Intervienen en reacciones alérgicas. - Basófilos: Intervienen en reacciones alérgicas. - Matriz extracelular: - Red estructural que incluye: - Proteínas fibrosas - Proteoglucanos - Glucoproteínas - Fibras: - Colágenos: Las fibras más abundantes, proporcionan resistencia tensora. - Reticulares: Formadas por colágeno tipo III, dan sostén a células. - Elásticas: Permiten que los tejidos se estiren. - Sustancia fundamental: - Ocupa el espacio entre células y fibras. - Principal constituyente: Proteoglucanos. ## Tejido adiposo (blanco) - Responsable de la síntesis y la secreción de leptina (hormona de la regulación de la homeostasis energética). - Funciones: - Almacenar energía. - Aislar y amortiguar órganos vitales. ## Tejido adiposo (pardo) - Núcleo excéntrico pero no aplanado. - Abundantes mitocondrias. - La oxidación de lípidos aumenta la temperatura de la sangre.